いつも大変お世話になっております。
この度は、マウス骨髄ストロマ細胞株のOP9の培養法についてお伺いしたい事があり、投稿させて頂きました。
OP9は通常、造血前駆細胞から免疫系細胞であるB細胞への分化及びその維持を支持できるストロマ細胞株として知られているかと存じます。
私の研究室でもこのOP9の分化支持能を生かして実験系を組もうとしたのですが。。。
何故か、徐々にOP9のB細胞分化支持能が失われてしまいます。
細胞を起こしてから最初二週間から一ヶ月くらいはB細胞分化支持能を持っているのですが、段々増える速度が格段に遅くなり、分化支持能も無くなってしまいます。IL7を入れているのにリンパ球がふえず顆粒球がドミナントにでて来るようになります。
OP9の見た目には問題があるとは思えないのですが、、、原因が分かりません。
通常OP9の培養にはalpha-MEM(GIBCO社製)を20%FCSにして使っております。
実は私の研究室では以前もOP9を使っておりましたがこの条件で分化支持能も問題なく維持できておりました。一度マイコプラズマが出て、その株は切らざるを得なくなり、新しく何回もOP9を入れましたが、上述のような次第でうまくゆきません。
現在は使っている血清が合わないのではないかという話になっておりますが、お勧めの血清、血清由来動物種、培養のコツなど何かご存知の方があれば、どんな事でも結構ですのでご教授頂けると大変ありがたいです。ちなみに、現在血清はJRHのFETAL BOVINE SERUM、lot No.6D0973のものを使っております。昔使っていた血清は数年前の事なので当然ながらもう同じロットは売ってはおりません。
どうぞよろしくお願い致します。 |
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