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(無題) 削除/引用 No.2053-7 - 2008/10/03 (金) 21:58:09 - K luciferase assayで10倍以上上がらないと意味がないということは無いと思います。実際のタンパク量がその刺激で増加すること等が確認できているのであれば、その転写活性の上昇は細胞内でそれなりに意味があると解釈して良いのではないでしょうか？ プロモーターには転写活性化因子が結合する領域だけでなく、転写抑制因子が結合している領域も存在していると思います。そのため5kbpの領域を削っていく過程でそのような転写抑制に必要な領域が失われればさらに転写活性が上昇する可能性もあると思います。

タンデム 削除/引用 No.2053-6 - 2008/10/03 (金) 20:05:42 - DDD りょうさんのおっしゃられているようにタンデムにするのも手ですね。 今の段階では5kbもあるとのことなので、もう少し領域を特定して狭めることができれば有効だと思います。 私も一概に基準は設定できないと思います。 ネガコンと比べて差があるようなので、それでいいのではないでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2053-5 - 2008/10/03 (金) 19:47:46 - 未熟者 あ、すいません。書き忘れていました。ネガコンとしてプロモータレスベクターを使っているんですが、刺激を加える前はネガコンとほぼ同程度の活性、刺激を加えたあとは３〜５倍程度でした。

(無題) 削除/引用 No.2053-4 - 2008/10/03 (金) 19:38:52 - 未熟者 目的はプロモーター領域の同定です。ちなみにプロモーター領域とおぼしき領域は5kbほどあり、重要な部位をさらに絞りたいと考えています。その5kbの部位でassayしたところ、３〜５倍あがったのですが、あるひとにデータを見せたところ「１０〜２０倍くらいはあがらないとなんとも。。。」と言われました。発現上昇の程度なんてモノによって違うから、一概に基準は設定できない気がするんですが、、、。

(無題) 削除/引用 No.2053-3 - 2008/10/03 (金) 19:21:14 - りょう タンデムに繋いだら上昇率高くなるのでは

それはやってみないと 削除/引用 No.2053-2 - 2008/10/03 (金) 19:14:42 - DDD Northern blottingで3倍だからといってLuciferase assayでも3倍とはなりませんよ。(もちろん3倍になる可能性もあります) そこはやってみないと。。。 やりたいことはプロモーター領域を同定というのでいいのでしょうか？ もうちょっと最終目的と、今回やろうとしている実験の目的を書ける範囲で お願いします。そうすれば、アドバイスもしやすいので。。。

luciferase assay 削除/引用 No.2053-1 - 2008/10/03 (金) 19:00:59 - 未熟者 培養細胞でLuciferase assayをやろうと考えています。 ある刺激を加えることで、発現が３倍に上がる遺伝子があります（ある論文のノザンブロットのデータです。自分でやったわけではないです。）この遺伝子の転写活性化にはたらく領域を見つけたいのですが、この場合luciferase assayではどうがんばっても三倍程度しか上昇しないんでしょうか？？lucで三倍となると、活性に重要な領域の一部を削ってどうなるか調べたり等のそれ以上の解析は難しいように思われますが、どうなんでしょうか？

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