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(無題) 削除/引用 No.2028-2 - 2008/09/29 (月) 15:14:27 - in situ 自分はRNAプローブを用いたFISHを主に行っていますが、同時に免染を行ったことがあります。 トピ主さんがどうやってプローブを検出しているのか（）わかりませんが、DIG標識プローブとかの場合、プローブの検出も免染と同じことをやるので、洗いすぎとかは考えずに、通常通りhybridizationの操作後、免染を行うのが良いと思います。 別にbufferをSSCにしてもよいと思いますが、すべての抗体が大丈夫であるとは保証できません。 また、hybridizationでホルムアミドを使ったりしていると、それによってタンパク質の抗原性が変化し、抗体が当たらなくなることがあります。 自分の場合、そのような状況に一度遭遇し、hybridization前にRNase inhibitor存在下で免染を行い、共染色に成功したことがあります。

免染でSSC 削除/引用 No.2028-1 - 2008/09/29 (月) 14:49:31 - やまさき hybridizationの後に免染を行おうと思っています。ハイブリは３７℃でバッファー組成はキットのため不明です。洗浄は2 x SSC 2分、1 x SSC　２分、0.2 x SSC ２分　２回です。プローブの長さやTm値は不明ですが、簡便化と洗いすぎの防止の為に、2 x SSCと1 x SSCの間に蛍光ラベルし一次抗体を反応させ、移行はプローブと抗体の洗浄を兼用しようかと思っています。免染の時のバッファーもPBSよりSSCにしようかと思っています。免染でSSCを使った経験はなく、大丈夫かどうか少し不安です。（予備実験すれば良いだけかも知れませんが・・・・）どなたかご存じの方ご教授下さい。

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