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(無題) 削除/引用 No.2011-5 - 2008/09/26 (金) 15:34:20 - おお 簡潔にかくと、 1.ノンスペ 2.ゲノムの増幅(今回この可能性はすくないかもしれません) 3.スプライシングアイソフォーム 4.-鎖から違う遺伝子がよまれている などです。 データーベースでゲノムやスプライシングアイソフォームなどを探すとともに、 そのバンドを切り出すなりして配列を確認すると良いと思います。 GAPDHは論文で発表されているのを使えばいいのでは?

(無題) 削除/引用 No.2011-4 - 2008/09/26 (金) 15:30:20 - こうし >動されるのですが、肝臓で行うとバンドは1本でも予定よりも数十塩基大きいところに泳動されてしまうものがあります。なにか理由がありますでしょうか。またある一つのものは100bpくらい大きいところに明瞭に余分な産物ができてしまいます、これは何なのでしょうか。 何なのかと問われても誰にもわかりません。splicing variantなのかノンスペなのかも配列確認してもらわないことにはわかりません。 まずはシークエンスしてください。 > さらに追加で質問させてください、internal controlとしてGAPDHを使用し これだけの情報ではなにが原因かは誰にもわかりません。 GAPDHなんかはいくらでも論文に掲載されていますから、掲載された配列でまず検討ください。

RT-PCR産物の組織による大きさの違い 削除/引用 No.2011-1 - 2008/09/25 (木) 09:49:37 - 初心者です いつも勉強させて頂いております。RT-PCR初心者です、馬鹿な事を書くかもしれませんがご教授いただければ幸いです。 現在マウス肝臓であるレセプター（10種類ほどあります）の発現をRT-PCRで確認しています。そのレセプターの発現が確認されている脳をポジコンとしてRT-PCRを行うと、予想通りのproduct size(200〜300bpの間で設計)に泳動されるのですが、肝臓で行うとバンドは1本でも予定よりも数十塩基大きいところに泳動されてしまうものがあります。なにか理由がありますでしょうか。またある一つのものは100bpくらい大きいところに明瞭に余分な産物ができてしまいます、これは何なのでしょうか。 さらに追加で質問させてください、internal controlとしてGAPDHを使用しようと思っているのですが、primer3を使って3種類くらい試してみましたが、まったくうまく増幅されません。product sizeは90bpくらいにしてあります。RT-PCRはinvitrogenのone step で行って、40サイクルくらいまわしています。キットの説明書を読むと200bp〜くらいのに適していると書いてあるのですが、one stepでやることが原因なのでしょうか。

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