全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.2000-3 - 2008/09/24 (水) 07:07:36 - タマキ おおさん、 まさに必要としていた情報そのものです。ありがとうございました！ 外注先に問い合わせたのですが、”50ng/ulに揃えてください”という答えでした。担当者とざっくばらんにはなせればいいんですが、そんな訳にも行かず困っていました。 また何かありましたらよろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.2000-2 - 2008/09/23 (火) 10:45:04 - おお 量という観点だけからなら、大丈夫と思います。おそらくbigDyeでラベルするのだと思いますので、そのキットのプロトコールを取り寄せて理解を深めると良いと思います。 http://www3.appliedbiosystems.com/cms/groups/mcb_support/documents/generaldocuments/cms_041329.pdf 実際にABIの推奨はDNAフラグメントの長さによって必要重量が変わっています。PCRプロダクトであれば100bpぐらいの長さのDNAで3ngぐらいとしていますし、2kbだと50ngとなっています。ですから、PCRプロダクトがそんなに長くなければ50ngは十分余裕のある量と思えます。 五倍ぐらい違ってもうまく読める時はきれいに読めますから2倍程度のぶれなら量的にはOKだと思います。現実1つずつはかってというのはあまりにも非効率的とお考えなら25ー100ngの範囲に収まっているならOKとしても良いとも思えますし、あとはすべて絶対に読めないと困るのかとか、読めないものは後で個々を当たって対応するてを取るのかとかでどうするかかわってくるかもしれません。それと実際に依頼する先に詳細を聞く方がいいと思います。ここで得た情報で勝手に結論づけるのもなんですので、、、

DNAシークエンス時の鋳型量 削除/引用 No.2000-1 - 2008/09/23 (火) 07:14:05 - タマキ DNAシークエンス時の鋳型DNA量はどの程度、厳密に調整する必要があるのでしょうか？ 96welプレートでPCR産物をミリポアの限外濾過システムで精製し、OD測定したところ、 1-4倍程度、濃度がばらついていました。シークエンス外注先の注意事項を読むと 50ng/ulに揃えてください。と書いてありますが、どの程度、忠実に揃える必要が あるのでしょうか？　 全サンプルを倍量希釈すると、25ng/ul 〜 100ng/ulになり ますが、この程度の精度でも、”常識はずれ”という訳では無いでしょうか？ ちなみに、受注先は3730システムで、600bp読めることを期待しています。 プレ実験ではPCR産物がシングルバンドであるということが確認できています。 プレートの枚数が多いので、１サンプル毎に希釈するのはとても大変そうです。 周りに経験者がいないので、手だれの方々の意見を伺えればとても心強いです。 よろしくお願いします。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---