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(無題) 削除/引用 No.1917-5 - 2008/09/09 (火) 11:03:13 - 大学院生 みなさんの言われるように、もう少し勉強して 自分で抽出試薬を作成してみようと思います。 ご指導ありがとうございました。

キットに頼りすぎないで・・・ 削除/引用 No.1917-4 - 2008/09/09 (火) 10:27:08 - K ＴＳさんが書いてくださっているのに同意です。 キットがあると、反応の意味やどうやって抽出するか、の意味を 考えなくても実験できちゃうんですよね。 高濃度の問題以前のような気がします。 お使いの細胞由来というわけでもないと思います。 ごく基本的な教科書を参考にされてはいかがでしょうか。

うーん。あまり言いたくはないですが。 削除/引用 No.1917-3 - 2008/09/09 (火) 00:45:46 - TS 少々、勉強不足を否めない気がします。 細胞溶解液に粘性が出る理由、それを解決する方法ともに、常識レベルだと思います。少し調べればわかるのではないでしょうか。 当該製品については、今少しデータシートを見ただけですが、PMSFが最初から添加されていたり、ごく普通のプロテアーゼインヒビターしか入っていませんせんし、購入するよりも自作した方が良いんじゃないですか？　経済的にも、メリットを感じません。（まぁそれに関しては、私が口を出すところではありませんが。） ただ、自分の目的にあわせて、どのデタージェントを選ぶとか、そういうところも勉強になると思いますので、少し教科書を読んだりして、自作してみたらいかがかと思います。粘性についても、すぐに解決すると思いますよ。

すみません 削除/引用 No.1917-2 - 2008/09/08 (月) 23:47:46 - 疲れてます ＞また、販売会社にも問い合わせをしてみましたが、回答は「よく混ぜて下さい」とのことでした。 すみません。これツボに入りました。笑いすぎて腹痛い‥

PRO-PREP（蛋白質抽出試薬）の使用 削除/引用 No.1917-1 - 2008/09/08 (月) 20:40:44 - 大学院生 初めて投稿させて頂きます。よろしくお願いします。 ウェスタンブロット法を行うにあたり、細胞株（SU-DHL-1）から 蛋白質抽出時にPRO-PREP（INTRON製）を用いてることを考えております。 添付文書では、400μlのPRO-PREP液で、5×10e6個の細胞を溶解すると、 2mg前後（濃度にして5mg/ml前後に相当）の蛋白質が抽出出来るそうですが、 思うように蛋白質が抽出出来ません。 400μlのPRO-PREP液に対して、溶解する細胞数を1.5×10e7個に 増やしてみましたが、それでも2mg/ml程度の濃度しか蛋白を回収 できません。 この試薬はホモジネートの必要は内容ですが、細胞数が多くなると粘稠に なるため、on iceでホモジネートも行っております。 また、販売会社にも問い合わせをしてみましたが、回答は「よく混ぜて下さい」 とのことでした。 PRO-PREP（INTRON製）の試薬を用いられている先生方で、高い濃度の 蛋白質を回収できた先生がいましたら、ぜひご指導頂けると助かります。 どうかよろしくお願い申し上げます。

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