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Re: 削除/引用 No.1891-2 - 2008/09/04 (木) 22:36:22 - UC 可能だと思いますよ。JJさんの書かれている方法で良いと思います。 つまり、すべてのプレートに、共通サンプル(これが、比較CT法でいうキャリブレータに相当)を用意しておいて、それで補正すれば良いわけです。この場合、何をキャリブレータにするかは、case by caseですが、例えば、各サンプルのcDNAからなるmixtureをcalibratorとするとか。何れにせよ、予め十分量のcalibratorを用意しておくことです。これが途中で不足するなんて事態は避けましょう。 　 ΔCT1 = CTtarget - CTcalibrator (Plate 1) 　 ΔCT2 = CTcontrol - CTcalibrator (Plate 2) 　ΔΔCT = ΔCT1 - ΔCT2 みたいな感じでしょうか。 ただ、理屈的には、これでＯＫなのですが、当然ながらPCR効率や、実験者の実験テクニックが、結果に大きく影響してきます。一度、preliminaryに、再現性を見ておくのがbetterでしょう。

比較CT法のアッセイ間の比較 削除/引用 No.1891-1 - 2008/09/04 (木) 12:45:10 - JJ いつも様々なトッピクを拝見させていただいています。 リアルタイムPCRの比較CT法のアッセイ間の比較について伺いたいのですが、 これまでに私はRocheライトサイクラーを使用し、 定量分析は付属ソフトのSecond Derivative Maximum法でCT値を算出していました。 しかし、1回のPCR反応に解析できる反応数は限りがあり、2、3回とPCRを行わなければ、その実験系での同一遺伝子の発現定量を今後、解析しなければならない場面に直面しています。 このような場合、比較CT法でこのような解析は可能なのでしょうか？ 例えば各PCR反応ごとに共通なサンプルを１サンプル使い、その共通なサンプルに対する発現量を各反応ごとに定量し、それから相対的に算出という考えで定量ができるのかな？と思うのですが。 これまでに比較CT法のトピックを拝見させてもらったのですが、 いまいち私は理解できていないので、 どなたか、このように解析するサンプル数が多い場合に比較CT法で定量を行っている方がいらっしゃいましたら 御助言の程、よろしくお願いします。

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