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(無題) 削除/引用 No.1843-5 - 2008/08/29 (金) 13:20:59 - おお >[Re:2] おおさんは書きました : > QIAGEN使ってましが、ちゃんと取れてました。ちょっと事情があってGEの同等のキット......、アジレントも売っているようです。プロメガもちゃんと取れるとは思いますが、ちょっと操作がしずらいかもという印象が個人的にはあります。 追加しておきます。シリカを使ったメンブレン(カラム)の方法のきっとは、他にもいろいろな会社が出していると思いますが、精製方法はほとんど変わらないと思いますので、純度的には問題ない場合がおおいです。ただオンカラムDNase処理ができるであるとかオプションとか、使いやすいとか、パッケージのバッファーの量にどれくらい余裕があるかとか、バッファーが切れた場合バラで売っているかなどといった要因のほうが実際に使っている時にストレスを感じたり不便に思ったりする原因になるのではという感じがします。因みにGEは細胞を溶解する最初のバッファーにあまり余裕がなく、私が問い合わせた時はバラでバッファーだけは売ってませんでした。

(無題) 削除/引用 No.1843-4 - 2008/08/29 (金) 13:09:30 - おお >[Re:3] himawariさんは書きました : > 私は安いということでTaKaRaのPrimeScript 1st strand cDNA Synthesisキットを使っているのですが、何かお勧めのキットがありますでしょうか。 残念ながらRTの方はキットは使ってません。オリゴdTとdNTPとインビトロジェンのスーパースクリプトIIかIII(とそのバッファーと添付でついてくるDTT)をまぜています。キットを使うほど大げさでもないなという感じがします。

(無題) 削除/引用 No.1843-3 - 2008/08/29 (金) 13:00:27 - himawari QIAGEN RNeasy Mini Kitを使ってます。GEヘルスケアのillustra RNAspinもなかなかよいキットですね。 ところで便乗質問なのですが、RT-PCR（cDNA合成）のキットは皆様は何をお使いになっていますか？ 私は安いということでTaKaRaのPrimeScript 1st strand cDNA Synthesisキットを使っているのですが、何かお勧めのキットがありますでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1843-2 - 2008/08/29 (金) 11:59:06 - おお QIAGEN使ってましが、ちゃんと取れてました。ちょっと事情があってGEの同等のキットをつかってますが、こちらも間違えはないと思います。RT-PCRでゲノムのコンタミを抑える方法としてDNase処理か、違う種類のカラムを使うかという意味で選択しがありますが、QIAGENはDNase処理なしでもゲノムのコンタミを抑えれるキットを売り始めましたし、アジレントも売っているようです。プロメガもちゃんと取れるとは思いますが、ちょっと操作がしずらいかもという印象が個人的にはあります。 カラムの欠点は特に従来のものは、小さなRNAのロスが大きいということです。200ベースとかそれ以下は要注意です(300ならOKかといわれるとその辺はわかりませんが、、、)。そういう意味ではTRIZOL(とかアイソジェン)を使う人も多いかと思います。TRIZOLは腕によって結構純度とかバラつくことが多い試薬です。単独でカラムほどきれいになりませんがRTPCRなら使っている研究室も多いのではとおもいます。

RNA抽出キットについて 削除/引用 No.1843-1 - 2008/08/28 (木) 22:41:56 - RNA 分子生物学の初心者です。 これまでは細胞の形態などを主に扱っていたのですが、 今度HUVECでRT-PCRをすることになりました。 これまでRNAを扱っていなかったのであまりよくわからないのですが、 調べるといろいろな抽出キットが売ってますね。 同様のことをしている論文を見ると、QIAGEN　の RNeasy miniprep　kitというやつを使ってるようですが、 皆さんはどんな方法でされているのでしょうか。 何かお奨めのキットなどあれば教えていただけないでしょうか。 よろしくお願いします

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