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ゲルからメンブレンへの転写について トピック削除
No.1816-TOPIC - 2008/08/24 (日) 22:54:31 - L
ウエスタンブロッティングを始めた初心者なんですが、ブロッキングをしてメンブレンをポンソーで染めたときに、ゲルからメンブレン（PVDF膜）に転写されたタンパク質（BSA）の量を調べるようにと言われたんですけど、どうやったら調べられますか？
　
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(無題) 削除/引用
No.1816-3 - 2008/08/25 (月) 10:53:47 - K
TSさんの回答に付け足す形になりますが。
膜に転写後のゲルをＣＢＢなどで染色して、転写が完全に行われたかゲルに残っているかを確認するのも必要だと思います。

(無題) 削除/引用
No.1816-2 - 2008/08/24 (日) 23:42:07 - TS
いまいち状況が飲み込めませんが、そのあたりは多少推測して答えますが。

既知の量のBSAを他のレーンに流しておいて、PonceauS染色後にスキャンして、スタンダードを作って、計算すればいいと思います。
BSA量が知りたいレーンには、少なくともBSAのバンド周辺に夾雑物がないことが条件になりますね。
それと、PonceauS染色は、ブロッキング前が良いと思います。

ゲルからメンブレンへの転写について 削除/引用
No.1816-1 - 2008/08/24 (日) 22:54:31 - L
ウエスタンブロッティングを始めた初心者なんですが、ブロッキングをしてメンブレンをポンソーで染めたときに、ゲルからメンブレン（PVDF膜）に転写されたタンパク質（BSA）の量を調べるようにと言われたんですけど、どうやったら調べられますか？
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