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ラット心筋線維芽細胞の初代培養 トピック削除
No.1796-TOPIC - 2008/08/20 (水) 14:12:00 -
最近、ラットの心筋から線維芽細胞を分離培養し始めました。
しかし、細胞がうまく増殖せず困っています。

細切した心室筋を24穴プレートに接着させ、10%FBS加DMEMを加えると線維芽細胞が増えますが、これを25cm2のカルチャーフラスコに移し変えるとほとんどの細胞が接着せずに浮遊しています。当然、細胞の増殖も悪いようです。
もしやと思い24穴プレートの別のウェルに植え替えても同様に細胞は増殖しませんでした。

細胞をはがす時にはPBSで洗浄してから0.5%トリプシンで1〜2分間処理して10%FBS加DMEMを加えています。

FBSのロットが問題なのか、トリプシンが問題なのか、それとも他に問題があるのでしょうか?

初心者なので基本的な質問ですが、ご教授ください。
 
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Re:ラット心筋線維芽細胞の初代培養 削除/引用
No.1796-2 - 2008/08/21 (木) 06:37:28 - ファイブロブラスト
ラットではありませんが、ヒト心筋片を10cmディッシュに数個おいて、動かない程度の培地を加え、増えるのを待つようにして、培養しています。動くとふえが遅いようです。十分増えたら、心筋片を別のディッシュに移してから、トリプシン処理を行い細胞をはがします。ご参考までに。

ラット心筋線維芽細胞の初代培養 削除/引用
No.1796-1 - 2008/08/20 (水) 14:12:00 -
最近、ラットの心筋から線維芽細胞を分離培養し始めました。
しかし、細胞がうまく増殖せず困っています。

細切した心室筋を24穴プレートに接着させ、10%FBS加DMEMを加えると線維芽細胞が増えますが、これを25cm2のカルチャーフラスコに移し変えるとほとんどの細胞が接着せずに浮遊しています。当然、細胞の増殖も悪いようです。
もしやと思い24穴プレートの別のウェルに植え替えても同様に細胞は増殖しませんでした。

細胞をはがす時にはPBSで洗浄してから0.5%トリプシンで1〜2分間処理して10%FBS加DMEMを加えています。

FBSのロットが問題なのか、トリプシンが問題なのか、それとも他に問題があるのでしょうか?

初心者なので基本的な質問ですが、ご教授ください。

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