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ターゲッティング、インサートの長さ、ES細胞 トピック削除
No.1704-TOPIC - 2008/08/04 (月) 08:34:41 - あかね
ES細胞でジーンターゲッティングをする際の、
インサートはどのくらいの長さ(何kb?)まで可能でしょうか?
また、通常の相同組み替えではない方法で、
より長いインサートを入れる方法をご存じないでしょうか?

相同組み替えで何キロくらいのインサートが挿入できるのか知らないので、
ここでの「より長い」とは相同組み替えによる限界の長さ以上の長さとさせていただきます。

すこし分かりにくいかもしれませんが、
よろしくご意見お願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.1704-5 - 2008/08/04 (月) 17:51:52 - 通りすがり
挿入したい領域の5'側と3'側にloxP配列を相同組換えにより導入しておいて、その後両側にlowP配列を持つインサートをCre発現状態で導入して、置換するなんてのはどうですかねぇ?
やったことは全くありませんが...。
理論的にはできなくはないと思うのですが、かなりトリッキーな実験だとは思います。

(無題) 削除/引用
No.1704-4 - 2008/08/04 (月) 16:57:02 - おお
mouse artificial chromosome (MAC)
と言うのがあります。

ノックイン 削除/引用
No.1704-3 - 2008/08/04 (月) 11:59:19 - あかね
早速のレスポンス有り難うございます。
50~100 kb程度のインサートをある決まった領域に挿入(ノックイン)することが目的です。

(無題) 削除/引用
No.1704-2 - 2008/08/04 (月) 11:50:03 - ~
何をしたいのですか?

細胞に入れるだけなら、相同組換えでない"micro-cell fusion"で染色体1本入れることが出来ます。
neoなどのタグをつけた目的の遺伝子が座上するヒト染色体を一度DT40などに入れて、組換えてから、好きな細胞に入れたらどうでしょう。

ターゲッティング、インサートの長さ、ES細胞 削除/引用
No.1704-1 - 2008/08/04 (月) 08:34:41 - あかね
ES細胞でジーンターゲッティングをする際の、
インサートはどのくらいの長さ(何kb?)まで可能でしょうか?
また、通常の相同組み替えではない方法で、
より長いインサートを入れる方法をご存じないでしょうか?

相同組み替えで何キロくらいのインサートが挿入できるのか知らないので、
ここでの「より長い」とは相同組み替えによる限界の長さ以上の長さとさせていただきます。

すこし分かりにくいかもしれませんが、
よろしくご意見お願いいたします。

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