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(無題) 削除/引用 No.1684-3 - 2008/08/01 (金) 15:28:30 - motipon 　つい最近、免疫染色と蛍光染色の三重染色をしました。 暗視野と明視野を使って、うまく染色できましたよ。 やってみられると、いいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.1684-2 - 2008/08/01 (金) 10:48:06 - 組織 同じ動物種の一次抗体、同じ酵素系であっても多重免疫染色が可能です。 ニチレイのホームページにプロトコールが載ってます。 http://www.nichirei.co.jp/bio/technical/index.html Dakoにもマニュアルがあったと思うのですが、見つけられませんでした。 ただ、前提としてどちらの抗体も単免疫染色できっちり染まっている必要があります。酵素発色系の二重染色はバックが強いと何が何だかわからなくなります。 >AP付二次抗体でFASTREDで染めてみたのですがいま一つでした これが気になるのですが、AP-FastRed系で使った抗体はHRP-DAB系で単免疫染色した時にうまく染まっているのでしょうか？AP系がHRP系に比べて特段に感度が悪いということはないので、そもそも染色条件（抗体の良悪も含めて）がうまくいっているか確認した方が良いでしょう。 >DABなどの発色反応と蛍光染色による二重染色というのは可能でしょうか？ 二重免疫染色ではなかったとおもいますが、明視野（光顕）と暗視野（蛍光）を使って共局在を示した論文を見たことがある気がします。残念ながら内容は忘れてしまいましたが。それぞれの局在がわかるように示せるのであれば、この方法もありだと思います。 ただいずれにしても、陽性細胞の同定が目的であれば、同じ細胞に２つのシグナルがかぶることになりますよね。シグナルの細胞内局在が同じ場合、発色系だと２色の共局在がかなり判別しづらいです。蛍光観察が可能であれば、蛍光二重免疫染色をお勧めします。一次抗体の動物種が異なるようですので、手技的にもやりやすいと思います。

二重染色についての疑問 削除/引用 No.1684-1 - 2008/07/31 (木) 22:30:12 - そめ 最近組織染色で二重染色をする必要に迫られ困っているものです。 マウスの組織でサイトカインを染色して陽性細胞数をカウントしていました。レフェリーに二重染色してサイトカインのソースをはっきりさせろと言われ必要に迫られています。 まずはAP付二次抗体でFASTREDで染めてみたのですがいま一つでした。 今はRAT抗マウス抗体とrabbit抗マウス抗体の2種類の1次抗体とニチレイのシンプルステインシステムでDAB発色で染色を行っています。 最近PO反応系のVIP基質での発色があると知り、またDABとの二重染色が可能と書かれてありました。実際に両方ともPO系の基質でうまく二重染色できるものなのでしょうか？ もう一つはDABなどの発色反応と蛍光染色による二重染色というのは可能でしょうか？論文などで見かけたことがないので一般的ではないのでしょうか？ ぜひ教えてください。

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