全7件 ( 1 〜 7 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.1659-7 - 2008/07/31 (木) 09:14:16 - 完熟マンゴー スクリーニングの際、anti-mouse Fc specific抗体を使えばIgMは回避できるのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1659-6 - 2008/07/30 (水) 22:38:55 - ブッチャー 細胞融合後、ハイブリドーマを殆ど全て拾えてますか？ 私も以前IgMしかモノクロが取れない時があり、何でかなぁと 思っていたのですが、ある人にメチルセルロース培地を勧められ ました。それは液体培地よりちょっと固くてゲルよりは少し柔らかい 培地です。融合後にその培地に生えてきたハイブリドーマをピペットマンで ピックアップしていきます。顕微鏡観察しなくて良く、目視で観察できる ので、見落としがほとんどないです。するとIgG型のモノクロが取れる ようになりました。偶然かもしれませんが、体験談として。 あとこの培地は基本的にハイブリドーマのクローンを拾うのでクローニング の時間が節約できます。

(無題) 削除/引用 No.1659-5 - 2008/07/30 (水) 09:33:06 - 果物みのる いろいろとご指導ありがとうございます。 次回の作製時には気合をいれます！

(無題) 削除/引用 No.1659-4 - 2008/07/30 (水) 09:28:58 - miu >IgMってIgGよりも早期で産生されるのでしょうか。 はい。クラススイッチを復習してみて下さい。 anti-mouse IgG (gamma specific）を固定化したプレートと ペプチド-OVA結合体をプレートに固定化のダブルスクリーニングを行えば確実でしょうが、そこまでみなさんやられているのでしょうか？ 僕は喉から手が出る程IgGが欲しかったので「そこまで」行いました。

(無題) 削除/引用 No.1659-3 - 2008/07/30 (水) 09:14:48 - 果物みのる 免疫の諸条件は下記の通りになります。 ■免疫抗原　：　ペプチド-BSA結合体 ■ハプテン　：　ペプチド（4残基程度） ■免疫投与間隔　：　初回→(14day)→2回目→（14day)→3回目（7day)→抗体価確認→最終免疫→（4day)→細胞融合 ■スクリーニング　：　ペプチド-OVA結合体をプレートに固定化 抗体価の確認はペプチド-OVA固定化プレートにより行いました。 3匹免疫し、抗体価の高かった2匹を細胞融合に適用したのですが 2匹ともIgM産生傾向が強いようでした。 IgMってIgGよりも早期で産生されるのでしょうか。 anti-mouse IgG (gamma specific）を固定化したプレートと ペプチド-OVA結合体をプレートに固定化のダブルスクリーニングを行えば確実でしょうが、そこまでみなさんやられているのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1659-2 - 2008/07/29 (火) 20:05:50 - miu 免疫抗原は何ですか？ タンパクですか？ 免疫回数４回とありますが、intervalはどれくらいですか？ ハプテンは何を用いましたか？ スクリーニングはどうやりましたか？ 僕は糖鎖のIgG抗体を作製していたので、あまり参考にはならないかもしれないですが、IgGだけがほしいという希望は一緒でした。 僕はそのため、スクリーニングをanti-mouse IgG (gamma specificという意味)の抗体でscreeningしました。 いくつか免疫した中で、IgGを作っていそうなマウスをfusionして、高効率にてIgG抗体をGetしました。 スクリーニングでanti-IgMへの反応性が高ければそのマウスはfusionに使わない方がいいかもですね。

IgMではなくIgGがほしいのですが。。。 削除/引用 No.1659-1 - 2008/07/29 (火) 19:12:36 - 果物みのる マウス免疫にてモノクローナル抗体を作製しました。 細胞融合、スクリーニング、クローニングと通常の手順で実験を進め、 マウス腹水化に移る直前にサブクラスチェックを行いました。 樹立したハイブリドーマの大半がIgMということが判明。 可能な限りIgG抗体を獲得したかったのですが、 何がまずかったのでしょうか。 ちなみに、免疫回数は4回、細胞融合は最終免疫から4日後に行いました。

全7件 ( 1 〜 7 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---