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(無題) 削除/引用 No.1641-3 - 2008/08/04 (月) 11:33:14 - ＤＮＡＩ 発現できないタンパクはどのようなタンパク（分泌or細胞内等）ですか？ 解析方法を誤っている可能性があるかと思いまして…。 もしくは毒性が高い、分子量が大きい等、他の成功しているタンパクとの違いはないでしょうか？ 分子量が大きい場合は感染後の回収時間を延ばすことで発現が増えるケースがありました。 また、MOIの最適化が必要なケースも経験してます。

＞バキュロウイルス：組換えbacmidについて 削除/引用 No.1641-2 - 2008/08/02 (土) 18:48:49 - とおりすがり バキュロ初心者さんへ ３つ中２つは出来ているようですから、地道に一番タンパク発現が 確認されるbacmidを探すのもいいかもしれませんね。

バキュロウイルス：組換えbacmidについて 削除/引用 No.1641-1 - 2008/07/26 (土) 10:12:16 - バキュロ初心者 初めての投稿で失礼いたします。 私は，今年の初旬よりバキュロウイルスー昆虫細胞系の実験を行っています。 現在，インビトロジェン社のbac-to-bac systemを用いて3つ中2つのタンパク発現を確認しております（SDS-PAGEレベル, P2ウイルス回収時のサンプルを用いた)。 しかし，残りの1つについて同様に操作を行っているのにもかかわらず，タンパク発現が確認できません。 3つの遺伝子について全てtransfer vectorの塩基配列を確認したところ，翻訳開始部分〜終了部分までに関して，全てコドンのずれなどがなく，transfer vectorの品質には問題ないと考えております。 そこで，ご質問ですが，大腸菌DH10Bacにtransfer vectorをtransformationした後に得られる組換えbacmidにおいて，コドンのずれなどは生じる可能性はあるのでしょうか？ ちなみに精製した組換えbacmidはPCRを用いてインサートチェックはしており，その結果では問題ありませんでした。 また，現在，数クローンからbacmidを調製し，再度transfectionにチャレンジしようと考えております（タンパク発現が確認された2つについてはそれぞれ1つの組換えbacmidをtransfectionしてアタリが得られました）。 アドバイスやご意見などを願います。

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