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(無題) 削除/引用 No.1594-5 - 2008/07/19 (土) 19:06:23 - TS Caco-2細胞をルーチンで使ってます。 それなりの種類のトランスフェクション試薬を試したことがありますが、 確かにリポフェクションでは導入しにくい細胞だと思います。 導入効果の高いものは、 LipofectaminLTX、Plus reagentの組み合わせか、FugeneHDですね。 この２つ方法は、だいだい同じくらいの効率で入ります。 siRNAやアンチセンスであれば、実験するのに十分な効率が得られると思いますが、プラスミドは実験によっては、安定株を取る方が無難な場合もあります。 GFPベクターでは、15%程度が光って見える、という感触です。実際には、光らない程度に導入されている細胞もいるんでしょうけど。

(無題) 削除/引用 No.1594-4 - 2008/07/19 (土) 16:13:36 - ats b-GalやGFPなどの導入細胞を視覚化できるレポーター遺伝子で、導入効率を検討すると良いでしょう。Caco-2細胞は使ったことはないですが、導入効率が低い細胞は結構ありますよね。 実験目的にもよりますが導入効率が5%くらいないと、目的の遺伝子の評価が難しいことが多いですし。 あきらめてレンチウィルスベクター（安定発現細胞）に変えたこともあります。

(無題) 削除/引用 No.1594-3 - 2008/07/19 (土) 15:03:46 - Tn ats様 ありがとうございます。 ご指摘になられた通り、自分でも調べてみたら結構導入例が見つかりました。不確かな情報に右往左往していただけかもしれません。 試薬の選択や条件検討をもう少し行おうと思います。

(無題) 削除/引用 No.1594-2 - 2008/07/19 (土) 12:54:10 - ats ググったら、簡単に見つかりました。 http://www.dojindo.co.jp/whatsnewsj/newpro/hilymax/protocol/caco2.pdf 他社の製品と同様に、遺伝子導入時の細胞密度は重要なようです。 他社の製品でも、導入例があるのでは？

Caco-2細胞へのトランスフェクションについて 削除/引用 No.1594-1 - 2008/07/19 (土) 12:45:59 - Tn 平素より勉強させていただいております。 現在Caco-2細胞へ遺伝子を一過性発現させる実験を行っております。 そこで質問なのですが、又聞きでCaco-2はトランスフェクションしにくいらしいという話を聞いたのですが、本当でしょうか？ 今現在私も、いくつか条件をふってもCaco-2で導入遺伝子産物がほぼ発現されていない状況で困っています。 トランスフェクションはリポフェクション法、Fugene6を用いています。 当該遺伝子はHEK293などでは導入できているようです。 実験上の都合から、できればCaco-2を使って実験を進めたいところなので、どなたかCaco-2に一過性に遺伝子を放り込んだご経験のある方がいらっしゃいましたら、アドバイスしていただけると幸いです。よろしくお願いいたします。

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