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In-Fusion PCR cloning トピック削除
No.159-TOPIC - 2007/09/07 (金) 00:49:45 - ねこたろう
In-Fusion PCR cloningを使ったことのある方おられれば効率等おしえてください。
　
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No.159-4 - 2007/09/26 (水) 10:00:55 - メロン屋さん
フィデリティーの高い酵素を用いれば、PCRのエラーはほとんどありませんでしたよー。

(無題) 削除/引用
No.159-3 - 2007/09/25 (火) 22:27:24 - ねこたろう
＞メロン屋さん
ありがとうございます。それほど効率が高いわけではないのですね。PCRでインサートを増幅するのでPCRエラーも影響してくる可能性もありますね。

(無題) 削除/引用
No.159-2 - 2007/09/25 (火) 20:37:30 - メロン屋さん
In-Fusion cloning systemを用い、pEGFP N1 vectorに目的の遺伝子（4400bp）を挿入しました。

ligationの後、溶液をTEで希釈しないでJM109 Competent cell 50μLにligation溶液を5μLいれ形質転換しました。

LB agarにコロニーが10個しかはえませんでしたが8個は目的の遺伝子を含むコロニーでした。

その後は、ligation溶液を希釈してやったことはありません。　

In-Fusion PCR cloning 削除/引用
No.159-1 - 2007/09/07 (金) 00:49:45 - ねこたろう
In-Fusion PCR cloningを使ったことのある方おられれば効率等おしえてください。
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