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マウス骨髄細胞のMACS トピック削除
No.156-TOPIC - 2007/09/06 (木) 12:47:06 - ひよこ
マウス骨髄細胞を回収し(回収はシリンジ・ニードル、20%FCS含有培地を用いています)、MACSによりlin-細胞を採り、さらに某細胞表面抗原
によりFACSでソートをしようとしています。

最近、
@MACSのカラムを通す段階でつまる(カラムを通す前にフィルターを通しています)
Aなんとか回収できたlin-と思われる細胞を濃縮するため遠心すると
 遠心後に凝集塊のようなふわふわした白いものがみられる
という現象が続いています。
以前(6月頃)に同様の実験をしていた時はこのようなことは起こっておりませんでした。
当時と今で、マウスの週齢や系統は変えていません。

このようなご経験をされた方はいらっしゃいますでしょうか・
また、なにか解決法などアイディアがあれば教えていただけないでしょうか?
 
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buy valium 削除/引用
No.156-3 - 2009/06/01 (月) 17:25:40 - HsvsRsvsesv
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DNaseは? 削除/引用
No.156-2 - 2007/09/06 (木) 14:05:32 - mom
カラムにかける前、ビーズとの反応後に凝集がみられたことがありました。
問い合わせをしたところ、死細胞のDNAがからまっている可能性があるのでDNase処理するよう勧められ、その後は凝集しなくなりました。
DNaseは細胞にビーズを加えるのと同時にfinal 10micro g/mLになるよう加えています。

マウス骨髄細胞のMACS 削除/引用
No.156-1 - 2007/09/06 (木) 12:47:06 - ひよこ
マウス骨髄細胞を回収し(回収はシリンジ・ニードル、20%FCS含有培地を用いています)、MACSによりlin-細胞を採り、さらに某細胞表面抗原
によりFACSでソートをしようとしています。

最近、
@MACSのカラムを通す段階でつまる(カラムを通す前にフィルターを通しています)
Aなんとか回収できたlin-と思われる細胞を濃縮するため遠心すると
 遠心後に凝集塊のようなふわふわした白いものがみられる
という現象が続いています。
以前(6月頃)に同様の実験をしていた時はこのようなことは起こっておりませんでした。
当時と今で、マウスの週齢や系統は変えていません。

このようなご経験をされた方はいらっしゃいますでしょうか・
また、なにか解決法などアイディアがあれば教えていただけないでしょうか?

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