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ありがとうございます。 削除/引用 No.155-3 - 2007/09/06 (木) 13:14:20 - メチコ ありがとうございます。 ＞ただし、pseudogeneが引っかかってくることもあり得ますので、クローニングしたORFの配列は確認しておいた方が安心でしょう。 そうですか、なるほどそういう可能性もあるのですね。勉強になりました。

(無題) 削除/引用 No.155-2 - 2007/09/06 (木) 10:54:29 - GPCR イントロンの無いことが確実であれば、ゲノムDNAからORFをクローニングすることに何の問題もありません。ただし、pseudogeneが引っかかってくることもあり得ますので、クローニングしたORFの配列は確認しておいた方が安心でしょう。

発現目的タンパクｃDNAをゲノムから取ってもいい？ 削除/引用 No.155-1 - 2007/09/06 (木) 10:48:09 - メチコ 基本的な質問ですがどなたか教えてください。 現在あるタンパクを無細胞系で発現しようとしています。 通常はｍRNAを取得してRT-PCRを行えばよいと思うのですが NCBIで遺伝子情報を取得したところ、目的遺伝子は全てcoding rearionであったため、イントロンはないとして、ゲノムをテンプレートにしてｃDNAを取得しようとしています。 しかし、データベースの利用方法もいまいち確信が持てないので 自信がありません。 例えばこの遺伝子HSP12　 ↓ http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=gene&Cmd=ShowDetailView&TermToSearch=850532&ordinalpos=1&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Gene.Gene_ResultsPanel.Gene_RVDocSum#refseq これなんかはイントロンがなさそうなので、ゲノムから増やしてもいいのかと私は思うのですが… また、たとえ情報としてイントロンがなくともやはりｍRNAを鋳型に使う方がタンパクを発現させるという目的では確実であったりするのでしょうか。

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