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FACS Sorting後、抗体を細胞から剥がす方法 トピック削除
No.1547-TOPIC - 2008/07/11 (金) 19:26:48 - negative sortができない事案
現在、FACS Vantageを利用してある細胞株をsorting後、sortingに使用した抗体を外して別の抗体で染めようと計画を立てています。

あるいはそのまま培養を継続していきたいと思っています。
初め、抗体は剥がさなくても取り込まれて分解するだろうと考えていたのですが、どうもそれだと細胞の増えが悪い事に気づきました。

できれば培養開始前に抗体を剥がしたいと考えております。

pHを下げる等、素人的には思い浮かぶのですが、みなさんが実際にやられて細胞へのtoxicityが出来るだけ少ない抗体の剥がし方をご存知であれば、どうかお教えいただけないでしょうか、宜しくお願い致します。

もし可能であれば具体的な試薬名、濃度、時間、反応温度など詳しく教えて頂けると幸いです。
　
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(無題) 削除/引用
No.1547-4 - 2008/07/12 (土) 23:08:37 - negative sortができない事案
うーんさん、ともさん

ありがとうございます。

トリプシン処理も考えましたが、どの程度処理すればいいというコンセンサスはあるのでしょうか？

質問に質問を重ね申し訳有りません。

(無題) 削除/引用
No.1547-3 - 2008/07/12 (土) 21:20:11 - とも
抗体をデタッチできる試薬売ってますよ。
原理は忘れました。多分その抗体に対するエピトープpeptideではがしたと思います。それかトリプシン処理ですかね。

(無題) 削除/引用
No.1547-2 - 2008/07/12 (土) 13:42:00 - うーん
TCR (T細胞受容体)からpHを下げるとpeptideが遊離して、それをMSにかけて抗原peptideを同定したりします。

TCRとBCR(抗体)は似て非なる物なので参考程度に…

FACS Sorting後、抗体を細胞から剥がす方法 削除/引用
No.1547-1 - 2008/07/11 (金) 19:26:48 - negative sortができない事案
現在、FACS Vantageを利用してある細胞株をsorting後、sortingに使用した抗体を外して別の抗体で染めようと計画を立てています。

あるいはそのまま培養を継続していきたいと思っています。
初め、抗体は剥がさなくても取り込まれて分解するだろうと考えていたのですが、どうもそれだと細胞の増えが悪い事に気づきました。

できれば培養開始前に抗体を剥がしたいと考えております。

pHを下げる等、素人的には思い浮かぶのですが、みなさんが実際にやられて細胞へのtoxicityが出来るだけ少ない抗体の剥がし方をご存知であれば、どうかお教えいただけないでしょうか、宜しくお願い致します。

もし可能であれば具体的な試薬名、濃度、時間、反応温度など詳しく教えて頂けると幸いです。
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