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PC12細胞へのトランスフェクション トピック削除
No.1489-TOPIC - 2008/07/04 (金) 12:10:47 - 細胞
PC12細胞へ遺伝子を導入して、目的タンパク質の一過性発現を行
おうとしています。PC12細胞を使うのは初めてのため、どこの会
社のトランスフェクション試薬を使うべきか検討しています。

そこで、実際に使っている方のご意見を聞いてみたいと思います。
どなたか、PC12細胞を使って実験を行っている方がおりましたら
おすすめのトランスフェクション試薬を教えてください。

ちなみに、目的タンパク質の発現によって、分化に影響が出るかも
見たいと思っているのですが、神経細胞に分化させる前のPC12に
トランスフェクトして、その後に分化を誘導できるのでしょうか?

こうした実験に取りかかるのが初めてのため、併せてアドバイスを
いただきたく思います。
 
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ありがとうございました。 削除/引用
No.1489-5 - 2008/07/04 (金) 14:04:18 - 細胞
なるほど。
ありがとうございます。参考になりました。

(無題) 削除/引用
No.1489-4 - 2008/07/04 (金) 13:36:35 - 修士2年
うちでは糖鎖合成酵素遺伝子を入れていましたので、酵素に対する抗体は残念ながらないため、合成されてくる糖鎖でもって発現の確認としておりました。薬剤抵抗性遺伝子も入れておりましたし大丈夫かなと。

もちろんRT-PCRで遺伝子レベルでも確認しておりました。

(無題) 削除/引用
No.1489-3 - 2008/07/04 (金) 12:43:15 - 細胞
ありがとうございましゅ。
リポフェクトアミン2000なら所有しておりますので、
すぐにできそうです。

発現の確認はどのように行っていたか参考までに聞いてもよろしいですか?
ウエスタンか、免疫染色か、GFP融合タンパクだったか、など。

(無題) 削除/引用
No.1489-2 - 2008/07/04 (金) 12:22:23 - 修士2年
できます。
lipofectamine2000で遺伝子導入できます。

その後、NGFで刺激して神経突起(といっていいかは別として)の伸長を測定しておりました。

なので大丈夫でしゅ。

PC12細胞へのトランスフェクション 削除/引用
No.1489-1 - 2008/07/04 (金) 12:10:47 - 細胞
PC12細胞へ遺伝子を導入して、目的タンパク質の一過性発現を行
おうとしています。PC12細胞を使うのは初めてのため、どこの会
社のトランスフェクション試薬を使うべきか検討しています。

そこで、実際に使っている方のご意見を聞いてみたいと思います。
どなたか、PC12細胞を使って実験を行っている方がおりましたら
おすすめのトランスフェクション試薬を教えてください。

ちなみに、目的タンパク質の発現によって、分化に影響が出るかも
見たいと思っているのですが、神経細胞に分化させる前のPC12に
トランスフェクトして、その後に分化を誘導できるのでしょうか?

こうした実験に取りかかるのが初めてのため、併せてアドバイスを
いただきたく思います。

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