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リンパ球の抑制試験 トピック削除
No.1453-TOPIC - 2008/06/29 (日) 20:14:11 - あん
このたびはお世話になります.

ある薬がある癌に対して効くかどうかを,cell lineを使ったvitroの実験系で調べようと思っています.まず,予備実験としcell lineなしの状態で,PBMCに対する薬の効果をみようと考えています.とりあえず,トリパンブルー染色を行って,評価をしています.そこで思ったのがMTTアッセイですが,この方法でPBMCの増殖抑制を調べることは出来るのでしょうか?自分の周囲では,cell lineに薬を加えてMTTをしている人はたくさんいるのですが,PBMCに対して,行った人がいないので,可能かどうか,分かりません.

もしご存知の方がいらっしゃったら教えてもらえますか?宜しくお願いしいます.
 
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(無題) 削除/引用
No.1453-11 - 2008/06/30 (月) 10:31:20 - kimwipe
私はタカラバイオのWST-1を使用したことがあります。
抗CD3抗体やマイトジェン刺激したPBMCsにWST-1を加え、
数十分後にプレートリーダーで測定しました。
結構きれいなデータ取れました。

(無題) 削除/引用
No.1453-10 - 2008/06/29 (日) 23:34:13 - うんこ
てかRI使いたくないようですね。

MTTと同じように安価で攻めるのならLDH(乳酸脱水素酵素)リリースを測定しなさい。

細胞が死ぬと培養上清にLDHが放出されて、それを測定するって感じかな。
簡便で安価です。そこそこ感度いいしね。

RI使うのであれば、クロムリリースを調べればよい。



amiさん^^
どうぞ。

(無題) 削除/引用
No.1453-9 - 2008/06/29 (日) 23:21:34 - それは
そもそもセルラインでやらずなぜかPBMCでの影響を見るってのがわけ分からん。

第一MTTなんて浮遊細胞に用いないやろ普通。接着なら分かるけど。
浮遊細胞用のWST-1という試薬を浮遊には用いた事はあったが。

>たとえ増殖しないにしても,PBMCへの傷害性みたいなものを評価できませんか?

おたく意味分かりませんよ?

そもそも増殖しないでしょ?
そこにクスリ加えて増殖しなくなった!!←わけわからん。

細胞障害性を調べたいのであれば、増殖ではなく障害性を調べるべきでしょう。たのむわほんま。

(無題) 削除/引用
No.1453-8 - 2008/06/29 (日) 23:10:36 - ami
> たとえ増殖しないにしても,PBMCへの傷害性みたいなものを評価できませんか?

って、、、

> この方法でPBMCの増殖抑制を調べることは出来るのでしょうか?

って言ってたじゃないですか、、、何がやりたいんですか

(無題) 削除/引用
No.1453-7 - 2008/06/29 (日) 22:23:37 - あん
何度も返事をありがとうございます.

増殖が盛んなものに対してしかMTTは相応しくないのですか?不勉強で申し訳ありませんが,詳しく教えていただけますか?

(無題) 削除/引用
No.1453-6 - 2008/06/29 (日) 22:21:17 - それは
ではMTTではだめでしょう。
MTT試薬は活発な細胞で調べるならわあkりますがPBMCでやるいみが分かりません。MTTはPBMCに使用すべきではないと思います。


第一、増殖に与える影響をみたいのであれば(PBMCには用いませんが)MTTでもいいと思います。
しかしねえ。もともと増殖せんやろ!!と怒鳴りたくもなります。。

トリチウムサイミジンとかでやったらいかがですか。

(無題) 削除/引用
No.1453-5 - 2008/06/29 (日) 21:58:19 - あん
amiさん,返事ありがとうございます.

たとえ増殖しないにしても,PBMCへの傷害性みたいなものを評価できませんか?

(無題) 削除/引用
No.1453-4 - 2008/06/29 (日) 21:51:35 - ami
> PBMCの増殖抑制を調べる
> 刺激なしで,単にPBMC+薬で72時間後などに評価するのは無理でしょうか?

増殖抑制を調べるもなにも、増殖しないんじゃないですか

(無題) 削除/引用
No.1453-3 - 2008/06/29 (日) 21:49:04 - あん
amiさん,返事ありがとうございます.

刺激なしで,単にPBMC+薬で72時間後などに評価するのは無理でしょうか?

(無題) 削除/引用
No.1453-2 - 2008/06/29 (日) 20:58:27 - ami
> PBMCの増殖抑制を調べる

できる思いますけど、どうやって刺激してPBMC増やすですか。

リンパ球の抑制試験 削除/引用
No.1453-1 - 2008/06/29 (日) 20:14:11 - あん
このたびはお世話になります.

ある薬がある癌に対して効くかどうかを,cell lineを使ったvitroの実験系で調べようと思っています.まず,予備実験としcell lineなしの状態で,PBMCに対する薬の効果をみようと考えています.とりあえず,トリパンブルー染色を行って,評価をしています.そこで思ったのがMTTアッセイですが,この方法でPBMCの増殖抑制を調べることは出来るのでしょうか?自分の周囲では,cell lineに薬を加えてMTTをしている人はたくさんいるのですが,PBMCに対して,行った人がいないので,可能かどうか,分かりません.

もしご存知の方がいらっしゃったら教えてもらえますか?宜しくお願いしいます.

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