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培養上清中の血清-6 削除/引用 No.1446-11 - 2008/07/10 (木) 11:42:45 - TGF

培養上清中の血清-5 削除/引用 No.1446-10 - 2008/07/02 (水) 17:48:56 - TGF R&D社製のTGF-β1，Human，ELISA　kit，Quantkine，2nd　Generation(96well)の中に，Calibrator Diluent　RD5-26　concentrateが付いていますが，これに活性化試薬(1N　HCL)を添加すると高値の吸光度が得られました． RD5-26の中身は，メーカーから教えていただけませんでした． RD-5-26をサンプルの希釈に使用したことが，原因だったのではないかと考えています． このような基本的なことも分かっていませんでした． 培養上清中の血清の影響ではなかったかも知れません． ご教授くださった方，ありがとうございました．

培養上清中の血清-4 削除/引用 No.1446-9 - 2008/07/01 (火) 18:07:35 - TGF TK-1さん，しまさん，mioさんありがとうございます． 皆さんのご意見を参考にさせていただきます． ELISAをこれまで使用したことがなかったので，本当に基本的な手技・手法が間違っていることがあるような気がします． もう少し，検討してみます． ありがとうございました．

(無題) 削除/引用 No.1446-8 - 2008/07/01 (火) 12:53:40 - mio 培養上清中のTGF-bを測定したいのであれば、無血清培地をお勧めします。 やっておられるように血清中のTGF-bが高く検出され、 本来測定したいTGF-bがマスクされてしまうと思いますし…

インキュベートについて 削除/引用 No.1446-7 - 2008/06/30 (月) 14:50:14 - しま R&Dの他のキットをよく使用しています。 特に記載がないなら、静置で大丈夫です。

(無題) 削除/引用 No.1446-6 - 2008/06/30 (月) 14:24:12 - TK-1 数十ng/ml程度と言われています。Hycloneのwebに試料があります。Art To Science, Vol. 19 No. 3, 2001に詳しく出ています。

培養上清中の血清-3 削除/引用 No.1446-5 - 2008/06/30 (月) 14:17:51 - TGF ありがとうございます． kitは，R&D社製のTGF-β1，Human，ELISA　kit，Quantkine，2nd　Generation(96well)です．培養上清や，血清中のTGF-βの測定は可能と書いて有りました．ただし5%以上の血清を含む培養液については希釈が必要とありました． 牛のTGF-β1との交差性について，メーカー(代理店)に問い合わせてもらったところ，確認されていないが，本kitは特異性が高いので，牛TGF-β1は，測定できないと考えていますとの返事をいただきました． 何か，基本的，手技的なことが原因ではないかもう少し検討してみようと思います． 基本的なところですが，"室温で2時間インキュベートする”と記載されていた場合，振とうインキュベートのことを意味しているのでしょうか？ ご教授ください．

(無題) 削除/引用 No.1446-4 - 2008/06/30 (月) 13:56:53 - DC キットはどこのメーカーのを使用なさっていますか？ BDなどの、サイトカインELISAでメジャーなメーカーであれば、培養上清や血清中のサイトカイン濃度を測定できる、と記載されています。 ご使用されているキットの取扱説明書には培養上清中のTGF濃度を測定可能、とあるのでしょうか。 また、キットの特異性が記載されている欄にもヒントはあると思います。 つまり、ウシTGFに交差するか、という事です。 一助になれば幸いです。

培養上清中の血清-2 削除/引用 No.1446-3 - 2008/06/28 (土) 17:11:11 - TGF ありがとうございます． お返事をいただく前に，サンプルの希釈倍率をさらに上げて測定してみました．検量線はきちんと引けるのですが，サンプルは1000倍，10000倍希釈しても，同様の高い値を示しました．検量線とサンプルの希釈溶液は同じです． 何かが，良くないのだろうと思うのですが，良く分かりません． キットのメーカにも問い合わせてみたいと思います．

(無題) 削除/引用 No.1446-2 - 2008/06/28 (土) 14:14:20 - 仕事中 まずはキットのメーカーにFBSが含まれている条件でTGFが測定できるのか確認を取るのがよいかと思います。 牛TGFと交差性のある抗体でしたら正確な測定は難しいでしょうし、交差性がないとしてもなんらかの妨害物質により測定できない場合もあります。

培養上清中の血清 削除/引用 No.1446-1 - 2008/06/28 (土) 12:52:58 - TGF ELISA　kitで細胞培養液中のTGF-βの測定を試みています． 培養上清中に，10%FBSが含まれています． この，FBS中のTGF-β濃度が定量に影響を及ぼすことが懸念されます． 通常FBS中にはどのくらいのTGF-βが存在するのでしょうか？ 培養上清の前処理法としてどのくらい希釈すればよいのでしょうか？ 試しに10倍，200倍希釈して測定してみたところ，検量線の範囲を超える高濃度を示しました．もっと希釈するべきなのか？手技が良くなかったのか分かりません． ELISA　kitを初めて使いました．ご教授ください．

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