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浮遊細胞のクローニング トピック削除
No.142-TOPIC - 2007/08/31 (金) 10:29:24 - 浮遊初心者
トランスフェクションして薬剤選択した浮遊細胞をクローニングをしようと思っています。
これまでに接着細胞では限界希釈法などでクローニングしたことはあるんですが、浮遊細胞では未クローニングのままで扱ってました。
この度、クローニングしようと思ったのですが、いかんせん浮遊細胞にあまり精通していないもので、皆さんから助言を頂きたいと思って書き込ませていただきました。

ちなみに細胞は、HEK 293-Fです。
 
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希釈の程度 削除/引用
No.142-5 - 2007/09/05 (水) 17:24:34 - seara
稀釈は3wellに一個入るように薄めたものをまいていくと手技誤差があってもどこかでモノコロニーがとれます。”浮遊”であっても播いたら放置しておくとコロニーを形成します。1個以上はいっていたらWell中のコロニーが複数形成されますので簡単に分かります。

(無題) 削除/引用
No.142-4 - 2007/08/31 (金) 17:43:40 - 浮遊初心者
blotさん、浮遊細胞でクローニングすると、細胞がちゃんと1個だけウェルに入ったかどうか分からなくないですか?そこらへんどうしてますか?よろしければ教えてください。

(無題) 削除/引用
No.142-3 - 2007/08/31 (金) 12:35:44 - blot
>限界希釈法
浮遊細胞も限界希釈法でcloningしています。

多分一番楽でてっとり早く、確実だと思います。

(無題) 削除/引用
No.142-2 - 2007/08/31 (金) 10:52:34 - デジャビュ
ごく最近、類似のトピックがありました。
http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?mode=view;Code=121

浮遊細胞のクローニング 削除/引用
No.142-1 - 2007/08/31 (金) 10:29:24 - 浮遊初心者
トランスフェクションして薬剤選択した浮遊細胞をクローニングをしようと思っています。
これまでに接着細胞では限界希釈法などでクローニングしたことはあるんですが、浮遊細胞では未クローニングのままで扱ってました。
この度、クローニングしようと思ったのですが、いかんせん浮遊細胞にあまり精通していないもので、皆さんから助言を頂きたいと思って書き込ませていただきました。

ちなみに細胞は、HEK 293-Fです。

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