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RNA抽出用サンプルの冷凍保存 トピック削除
No.1414-TOPIC - 2008/06/24 (火) 12:37:40 - RT-PCR初心者
どなたか教えてください!
現在、飲料などを使ってRT-PCR実験をしておりますが、サンプルの保存について適切な方法がわからずとりあえず冷蔵保存しています。
サンプルは、特定の微生物が増殖した液状サンプル(培地のみや培地+固形サンプル)です。冷凍保存してもよいように思うのですが、とりあえず冷蔵保存にて保管しています。凍結融解の繰り返しは良くないように思いますので、培養終了後に小分けして、-20あるいは-80℃に保存しておけば、RNA抽出用サンプルとして問題なく保存できるのでしょうか?
よろしくおねがいします。
 
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RNA抽出用の冷凍保存 削除/引用
No.1414-6 - 2008/06/24 (火) 14:26:46 - RT-PCR初心者
みなさまありがとうございます。

可能な限り、培養液(飲料+菌体)の形で遠心などの処理を行わずにとおもったのですが、どうも難しいそうですね。といいますのは、一度、大量に培養しておいて、後日、種々の実験に使おうという意図で(計画がデータによって日々修正されるので)お伺いしました。
ある程度、緻密な実験計画を立てて、1mL分なり、10mL分なりのペレットにして小分けして、-80℃で保存しておくのが良さそうですね。

(無題) 削除/引用
No.1414-5 - 2008/06/24 (火) 13:25:00 - パンタ
実験計画にもよるとは思いますが、RNA抽出してエタチンなりで保存がよろしいのでは?

冷蔵ということはその微生物は多少なりとも生物活性があるわけで、~さんのおっしゃるとおり、RNA分解(あるいは発現?)などが起こっても不思議ではないと考えます。ペレットにして−80℃とかはできませんか?

(無題) 削除/引用
No.1414-4 - 2008/06/24 (火) 13:05:33 - ~
>現在、飲料などを使ってRT-PCR実験をしておりますが、
あれ、飲み物中に微生物を増やしていると思って#2を書きましたが、違いました?

複数回のRT-PCRをする理由によって、
どの時点で小分けをするべきかが変わってくるかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.1414-3 - 2008/06/24 (火) 12:55:22 - それは
>どなたか教えてください!
現在、飲料などを使ってRT-PCR実験をしておりますが、

すみません、飲料って何ですか?

(無題) 削除/引用
No.1414-2 - 2008/06/24 (火) 12:46:37 - ~
私ならば、
生きている微生物を冷蔵保存しておくと、どのようなRNA量の変化が起きるのか全く想像できないので、
遠心して、微生物のペレットにしてから保存したり、
ペレットを適当な溶解液でリシスしてから保存します。

RNA抽出用サンプルの冷凍保存 削除/引用
No.1414-1 - 2008/06/24 (火) 12:37:40 - RT-PCR初心者
どなたか教えてください!
現在、飲料などを使ってRT-PCR実験をしておりますが、サンプルの保存について適切な方法がわからずとりあえず冷蔵保存しています。
サンプルは、特定の微生物が増殖した液状サンプル(培地のみや培地+固形サンプル)です。冷凍保存してもよいように思うのですが、とりあえず冷蔵保存にて保管しています。凍結融解の繰り返しは良くないように思いますので、培養終了後に小分けして、-20あるいは-80℃に保存しておけば、RNA抽出用サンプルとして問題なく保存できるのでしょうか?
よろしくおねがいします。

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