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ウエスタンでの1次抗体溶液の再利用 トピック削除
No.140-TOPIC - 2007/08/31 (金) 06:57:35 - やすこ
 最近ウエスタンを始めたのですが、細かいことでわからないことが出てきます。
 1次抗体溶液は、使用後再利用できるようですが、保存条件、保存期間などもしご存知のかたがいらっしゃったら教えてください。
 
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No.140-9 - 2007/09/05 (水) 08:09:55 - ?
私はミルクで−20度保存の3年物の抗体を使っています。アジ化ナトリウムは無しです。月数回程度の使用ですが、まだ使えてます。沈殿も出ていますが気にせず使ってます。私の使っている抗体はほとんどが1年以上前からミルクで使っているものです。ただ、常に4度オーバーナイトで処理して、室温には置かないように気をつけてはいます。一方で、数回の再利用でシグナルがあっという間に弱くなる抗体もあります。抗体は貴重ですし、うちではシグナルが弱くなってくるまでは使い続ける方針でやっています。

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No.140-8 - 2007/09/04 (火) 19:06:34 - A
同僚はアジカナトリウムは入れないでスキムミルク溶液に溶かした抗体を
使用後何時も凍結してました。皆さんが仰られるように再利用の場合は
シグナルが弱くなるので貴重な抗体でなければしませんが3回は使えて
いました。

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No.140-7 - 2007/09/04 (火) 09:54:30 - トラ
うちではミルクだろうがBSAだろうがアザイドを入れて4℃で保存、バンドが出ない、腐ってしまうなどのトラブルがでるまで使っています。
大抵はバンドが出なくなるより前に腐ってしまう(?)ゲル状になってしまう方が早いのですが...
アザイドの効きが悪いのかもしれないですが余り大量にアザイドを入れても悪さしそうなのでこのくらいにしておいています。大体1月くらいは持つように思います。

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No.140-6 - 2007/09/01 (土) 21:43:25 - M&S
>アジ化ナトリウムが入っていても、ミルクやBSAが入っていたら、4℃で数年も大丈夫なのでしょうか?

一次抗体は1%BSAの液で使用していますが、沈殿ができるのは確かにありますね。その場合は使用せずに廃棄することにしています。経験上保存期間よりも使用回数のほうが感度に影響していると考えています。使用するたびにわずかに濃度が落ちているはずなので。
ただ泳動サンプルが貴重な場合は躊躇しないで新しいのを使います。要するに時間とサンプルの都合でバランスを取るのがいいかと。

助かりました。 削除/引用
No.140-5 - 2007/09/01 (土) 00:38:46 - やすこ
アドバイスありがとうございます。とても助かりました。
試してみながらやってみます。

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No.140-4 - 2007/08/31 (金) 18:11:44 - TS
使用頻度にもよりますが、1月以内にまだ数回使用する予定があれば、アジ化ナトリウム入れて、4℃で保存しておきます。わたしは、4℃での保存の場合は、ひと月くらいで捨てます。

しばらく使用する予定がわからないときは、凍結してしまいます。アジ化ナトリウムは、一応入れておきます。一概には言えませんが、だいたいの抗体は問題なく使えました。

ただ、新鮮な抗体の方がシグナルが強く出るタンパク質もありましたし、全ての抗体で大丈夫、ということではないので、その辺は試してみるしかないとは思います。

アジ化ナトリウムが入っていても、ミルクやBSAが入っていたら、4℃で数年も大丈夫なのでしょうか?私の場合は、沈殿とか見えてくるし、だめな気がしてましたけど。

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No.140-3 - 2007/08/31 (金) 13:48:43 - M&S
うちの研究室では使用後にNaN3を0.05%になるように加えて4℃に保存し、一つの抗体につき五回程度を目安に再利用しています。
先日二年前にストックした抗体を使用したら問題なく使えたので長期保存も可能なようです。ただ保存期間は抗体の種類にもよると思うので保障は出来ません。

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No.140-2 - 2007/08/31 (金) 09:48:58 - bloot
特に特別な事はなにもありません。

4℃で保存。不安ならアジカナトリウムを添加しておく事くらいです。

ウエスタンでの1次抗体溶液の再利用 削除/引用
No.140-1 - 2007/08/31 (金) 06:57:35 - やすこ
 最近ウエスタンを始めたのですが、細かいことでわからないことが出てきます。
 1次抗体溶液は、使用後再利用できるようですが、保存条件、保存期間などもしご存知のかたがいらっしゃったら教えてください。

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