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そうです 削除/引用 No.1382-3 - 2008/06/20 (金) 13:48:08 - 素人 説明不足でした。ご指摘の通り、パラフィン切片を用いてます。 薄切してから、２日ほどおいても、大丈夫そうなので安心しました。 話には聞いていましたが、EDTAは本当にすぐはがれてしまいそうですね・・・。これからは３７度で１晩おいてから、染色してみようと思います。 ありがとうございました。

パラフィン切片ですよね 削除/引用 No.1382-2 - 2008/06/20 (金) 13:20:17 - 組織 > 薄切してから長時間放置しておくと、染まりにくい 一般的にはその通りですが、ケースバイケースでもあります。CD分子みたいなデリケートな抗原は、薄切したその日に染めた方が良いと言われています。逆に、切ってから数ヶ月おいた切片でも、しっかり染まった経験もあります。抗原の量や安定性によると解釈してます。 > 金曜日に薄切し、週末あけて、月・火曜で染色> > 薄切して伸展器で１〜２時間放置（４２度）→電源を切って放置→翌日免疫染色開始 問題ないと思います。 > ３７度でover nightしたほうがいいのでしょうか？いつもはクエン酸buffer を使用して賦活化してるのですが、近々クエン酸よりはがれやすいという、EDTAでする予定があります・・・。 EDTAは結構剥がれますね。初めて使ったとき、マイクロウェーブ後に切片が残ってなくてびっくりしました。剥離防止のために、37℃で長時間乾燥した方が無難でしょうね。私は薄切後50℃で１〜２時間、そのあと37℃で1晩乾燥して、室温で保存してます。

免疫染色に使う切片について 削除/引用 No.1382-1 - 2008/06/20 (金) 10:05:52 - 素人 免疫染色を始めて間もない初心者です。 免疫染色は１次抗体を滴下し、over night で翌日続きを・・・という感じで、２日かかるわけですが、その前の段階の準備で質問があります。 �@染色に使う切片は、薄切してから長時間放置しておくと、染まりにくいと聞きました。薄切して、どのくらい放置してても大丈夫なものなのでしょうか？ 例えば、金曜日に薄切し、週末あけて、月・火曜で染色しても、大きな影響はありませんか？ 通常は薄切して伸展器で１〜２時間放置（４２度）→電源を切って放置→翌日免疫染色開始というような感じです。。 �Aちなみに電源を切って切片を放置、染色して、今まで特に問題はなかったのですが、３７度でover nightしたほうがいいのでしょうか？いつもはクエン酸buffer を使用して賦活化してるのですが、近々クエン酸よりはがれやすいという、EDTAでする予定があります・・・。 どなたか経験のあるかた、ご教授していただきたいです。 よろしくお願いします。

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