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マウス膝関節からのmRNA抽出について トピック削除
No.1346-TOPIC - 2008/06/17 (火) 10:08:15 - muu
こんにちは

骨を含むマウス膝関節からmRNAを抽出したいと考えていますが、骨を含む組織を破砕する方法がわかりません。現在は、RNA laterに組織を浸けてある状態です。

骨を含む組織からmRNAを抽出する場合には、どんな方法が考えられるでしょうか.
ご存知の方がいらしたら、ご教授願えないでしょうか。

よろしくおねがい申し上げます。
 
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さとし様 削除/引用
No.1346-5 - 2008/06/19 (木) 12:06:18 - muu
回答ありがとうございました。
いくつか条件をふって検討してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.1346-4 - 2008/06/18 (水) 17:01:58 - さとし
使用するホモジナイザーと骨の大きさや脱灰レベルに依存すると思います。
お使いのもので検討されてみてはいかがでしょうか。

粉砕に使用する機具は凍結粉砕器で調べてみてください。
参考までに私は下のものを使っています。
http://www.kenkyu40.net/item_193957.html

さとしさま 削除/引用
No.1346-3 - 2008/06/17 (火) 17:01:32 - muu
早速の回答、ありがとうございます。
RNA laterは自作できるのですね!しかもEDTAの組成を変えることで脱灰も同時にできるなんて。。。大変参考になりました。

さとし様の記事に関して、基本的なことを2点質問させてください。
1. 脱灰後の骨組織は液体窒素による粉砕なしでホモジナイズ可能でしょうか。
2. 液体窒素で凍らせた後、破砕する際にはなにを用いておられますか?乳鉢とか?

よろしければご回答お願い致します。

(無題) 削除/引用
No.1346-2 - 2008/06/17 (火) 10:44:08 - さとし
現状では一度液体窒素に入れて砕いてからTrizolなどに入れて、
ポリトロンなどのホモジナイザーで破砕することが
一般的に用いられていると思っていますが、、、
他の方の意見も伺いたいところです。

ここでも以前に取り上げられていますが、
RNAlaterは自作できるので,EDTAを多く加えた状態のものを調製し
今のRNAlaterから移して脱灰させたサンプルを
ホモジナイズしても良いと思います。

http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?start=1;mode=view;Code=726

マウス膝関節からのmRNA抽出について 削除/引用
No.1346-1 - 2008/06/17 (火) 10:08:15 - muu
こんにちは

骨を含むマウス膝関節からmRNAを抽出したいと考えていますが、骨を含む組織を破砕する方法がわかりません。現在は、RNA laterに組織を浸けてある状態です。

骨を含む組織からmRNAを抽出する場合には、どんな方法が考えられるでしょうか.
ご存知の方がいらしたら、ご教授願えないでしょうか。

よろしくおねがい申し上げます。

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