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(無題) 削除/引用 No.1277-5 - 2008/06/06 (金) 23:38:38 - t ゲノムのコンタミでしょう。 この辺のことは教科書または先輩にどうぞ。。。

(無題) 削除/引用 No.1277-4 - 2008/06/06 (金) 23:09:23 - AP プラスミドのサイズは分かっていますか。 10〜20 kbくらいだとしたら、ccc （super coiled）は5 kbくらい、OC（open circular）はほぼlinearと同じくらい、10〜20 kbにバンドがでます。 プラスミドを精製してそのまま泳動すると、cccと自然にニックの入ったOCやlinearのバンドがでます。 プラスミドをone-cutする制限酵素で消化してから泳動すれば、すべてlinearになって単一のサイズをあたえるはずですし、複数切る酵素ならバンドサイズの合計が全長に一致するはずです。このようにチェックしなければはっきりしたことは分からない、これ基本です。

(無題) 削除/引用 No.1277-3 - 2008/06/06 (金) 21:50:56 - ~ ゲノムのコンタミは否定できているのですか？

(無題) 削除/引用 No.1277-2 - 2008/06/06 (金) 20:57:15 - それは プラスミドをアガロースゲル電気泳動したんですよね。 おそらく、それはプラスミドのとっている構造を反映しているものだと思います。 コンタミでないとしても。 ねじれているだけでbandは別の高さに出ますし。 このような質問は以前に何度も出ていますので、改めてトピックを立てず、一度キーワードを入れて調べてください。お願いします。

プラスミドのコンタミ 削除/引用 No.1277-1 - 2008/06/06 (金) 20:53:45 - saki あるタンパク(full lengthで50kDa)ほどを大腸菌で 発現させ精製したいと思っています。 タンパクの配列が入っているプラスミドを 他研究室より譲って頂き(おそらくpGEXに入っています) まずプラスミドを増やすために DH5αで増やし、ミニプレップ後 アガロースでチェックをしました。 結果、5000bp前後と10000bp-20000bpに 二本バンドが出ました。 この場合、ゲルからプラスミドを抽出し直すのがベストなのでしょうか。 また、10000bp-20000bpに出たバンドは その目的タンパクが入っていると考えても良いのでしょうか。 大変初歩的な質問ですが、よろしく御願致します。

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