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CBB染色後のゲル トピック削除
No.1166-TOPIC - 2008/05/20 (火) 10:14:28 - CBBRC
SDS-PAGE後にCBB染色を室温で10分ほど行ない、脱色を一時間ほど行ないましたがあまりバンドが見えませんでした。
そのまま脱色後のゲルを水に浸して室温で一晩放置して次の日に見てみると前日には見えなかったバンドが多数、はっきりと確認できました。

タンパクに結合したSDSが抜けて見えやすくなったんじゃないか、という話を聞きましたが、実際は染色されていないゲルのバックグラウンドが下がったような感じです。このような体験をされた方はいらっしゃいませんか?
また、どのような原理でこのような現象が起こるのでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.1166-5 - 2008/05/20 (火) 12:31:25 - AP
>そのまま脱色後のゲルを水に浸して室温で一晩放置して次の日に見てみると前日には見えなかったバンドが多数、はっきりと確認できました。

それって、ふつうではないでしょうか。おっしゃるとおり、バックグランドの色抜きをしないときれいに見えません(染色って本来そういうもんです)。
私は、短時間の脱色後におおよそのところをチェックすることはあっても、最終的には一晩くらい脱色します。
早く脱色するために、活性炭を入れたり電子レンジにかけたりというtipsはありますが、きれいに仕上げるには時間がかかるものと思ってください。

(無題) 削除/引用
No.1166-4 - 2008/05/20 (火) 12:31:20 - L
よく文面を見直すと、どうも脱色不足のようですね
見当違いのことを書いてしまってすみません

(無題) 削除/引用
No.1166-3 - 2008/05/20 (火) 12:20:30 - おお
ただバックグランド(タンパクにけつごうしてないCBB)がぬけただけだとおもいます。

(無題) 削除/引用
No.1166-2 - 2008/05/20 (火) 11:31:32 - L
CBB-G250で染めてませんか?
CBB染色は普通、CBB-R250でやりますが、
ある種の染色キットはCBB-G250が使われているようです
G250による染色はSDSによって阻害されますので、
染色前に蒸留水で洗浄する必要があります

CBB染色後のゲル 削除/引用
No.1166-1 - 2008/05/20 (火) 10:14:28 - CBBRC
SDS-PAGE後にCBB染色を室温で10分ほど行ない、脱色を一時間ほど行ないましたがあまりバンドが見えませんでした。
そのまま脱色後のゲルを水に浸して室温で一晩放置して次の日に見てみると前日には見えなかったバンドが多数、はっきりと確認できました。

タンパクに結合したSDSが抜けて見えやすくなったんじゃないか、という話を聞きましたが、実際は染色されていないゲルのバックグラウンドが下がったような感じです。このような体験をされた方はいらっしゃいませんか?
また、どのような原理でこのような現象が起こるのでしょうか?

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