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(無題) 削除/引用 No.114-4 - 2007/08/27 (月) 16:57:25 - Ｔ ・菌株を BL21(DE3) pLysS, pLysE に変える ・菌株を BL21 に変え、λCE6 ファージの感染によって蛋白発現を誘導する

(無題) 削除/引用 No.114-3 - 2007/08/27 (月) 16:21:03 - パンタ ~さん、ご回答ありがとうございます。 毒性に対してはグルコースを添加することで回避したつもりだったんですが、、、 とりあえず温度を変えてやってみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.114-2 - 2007/08/27 (月) 15:03:02 - ~ 細胞毒性のある蛋白質が発現しているのではないでしょうか。 まずは、プレートを37度ではなく、30度と室温でインキュベートしてみてはいかがでしょうか。 ベクターを変えるのは面倒なので、温度で対応できれば楽だと思います。

タンパク質発現前にコロニーが生えない 削除/引用 No.114-1 - 2007/08/27 (月) 13:09:50 - パンタ いつもお世話になっています。 現在pRSET vector (invitrogen)を用いてタンパク質発現を行っています。どこでつまずいているかといいますと、DH5aを用いて配列を確認後、BL21(DE3)にプラスミドを入れなおしているのですが、そこでコロニーが生えてくれません。 今回は、５つの異なるタンパク質の活性を比較するのですが、1つだけ生えてこず、他の4つはコロニーが生えました。ちなみに4つのクローンに関してはタンパク質の発現が確認されました。したがって、BL21や抗生物質には問題ないと考えています。 何とかならないかと、プレートにグルコースを2％添加してみたり、プラスミドの量を増やしてみたりしましたが、全く生えてきません。 このような場合、原因と対策はどのようなものになるでしょうか？ よろしくお願いします。

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