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初代培養T細胞の凍結ストック作成
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No.1101-TOPIC - 2008/05/08 (木) 19:01:14 - amits
お世話になります。
ヒトとマウスのT細胞のPrimary Cultureを行い、Freeze Stockを行ってみているのですが、Thaw後に細胞が増殖しません。どなたか、うまく行っているプロトコルをお持ちでしたら教えてください。
RPMI1640+10% DMSOで-80℃にストック、セルバンカーで-80℃にストックというのは試みましたがうまく行きませんでした。
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No.1101-3 - 2008/05/08 (木) 19:23:04 - amits
コメントありがとうございます、
刺激はPHAなりAnti-CD3-Coated Plate+IL-2なりSpleen CellをFeeder細胞にしたりで、増殖するところまでは行っています。ぼちぼちと増えているときに、Freezeストック→Thawすると、まったく増えなくなり、死んでしまいます。
(無題)
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No.1101-2 - 2008/05/08 (木) 19:07:05 - りょう
ストックの問題というより:
ストックしたことないので分かりませんが、
初代リンパ球なら幼若化させる刺激を与えないと増殖しないのでは?
単離した状態ではrestingだと思います。
間違ってたらすみません。
初代培養T細胞の凍結ストック作成
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No.1101-1 - 2008/05/08 (木) 19:01:14 - amits
お世話になります。
ヒトとマウスのT細胞のPrimary Cultureを行い、Freeze Stockを行ってみているのですが、Thaw後に細胞が増殖しません。どなたか、うまく行っているプロトコルをお持ちでしたら教えてください。
RPMI1640+10% DMSOで-80℃にストック、セルバンカーで-80℃にストックというのは試みましたがうまく行きませんでした。
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