全11件 ( 1 〜 11 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

細胞内染色 削除/引用 No.1096-11 - 2008/05/10 (土) 19:26:33 - as それも考えたんですが…やった人がいなくて躊躇してます。 強い刺激を入れないとなかなか検出も難しいと聞いて。mRNAやELISAの方が見やすいのかなと思っていました。 細胞内染色も検討してみます。ありがとうございました！

(無題) 削除/引用 No.1096-10 - 2008/05/10 (土) 19:22:03 - ＴＸ サイトカインの産生はサイトカインなどの液性因子、Cell-Cellinteraction、ligandなどにより誘導されます。 したがって、DCのIL-10以外のサイトカインやケモカイン、 cell-cell interaction（MHC class,B7など）に関わる レセプターの発現などをもっと調べる必要があるでしょう。 もっと、詳細な検討をするならDCにはmDCとpDCがありますから IL10mRNAが高いのはどちらの細胞なのかも調べる必要があるでしょう。 ポピュレーションが少ないので結構難しいですが。 一つの可能性としてはDCのIL-10産生が高いということは CD4+T細胞をTH1に分化させるDCよりもTh2に分化させるDCが多いのかも。 Th2T細胞はIL10の発現高いですからね。（うる覚えで書いているので 論文などで確かめて） ということは,共培養した時のCD4+T細胞のサイトカイン発現やGATA3などの 遺伝子発現、細胞内サイトカインのサイトカインバランスを最終的には調べるのも手かも。 樹状細胞とT細胞の総説をNature review immunolとかで読めばいいのでは？

(無題) 削除/引用 No.1096-9 - 2008/05/10 (土) 18:24:28 - amits CD3 - IL10 2色で

(無題) 削除/引用 No.1096-8 - 2008/05/10 (土) 18:20:19 - amits 未だによくわかりませんがIL-10のIntracellular stainingじゃだめですか

実験系 削除/引用 No.1096-7 - 2008/05/10 (土) 18:06:33 - as 細胞は、培養株ではなくマウスから取ってきたばかりの細胞(初代培養？）です。 あるマウスで樹状細胞がコントロールと比べてIL-10mRNA発現が高くなりました。そしてこの樹状細胞とT細胞を共培養したとき、コントロールマウス由来の樹状細胞との共培養に比べて上清中のIL-10産生が高くなりました。なので知りたいことは、このIL-10の上昇が、DC由来なのかT細胞由来なのかということがまず始めにありました。 これは１）培養後の細胞がほぼT細胞の状態であり、この細胞のIL-10mRNA発現が上昇したこと、２）DC単独培養ではサイトカイン量は非常に少ないこと、そして３）培養前はDCでIL-10mRNA発現が上昇しており、T細胞のIL-10mRNAが検出できないぐらいの低いレベルだったことから、DCがIL-10を出し、それを受け取ったT細胞がIL-10を高産生するのかと考えました。なので今後はこれを証明できないかと考えています。 でもTXさんのおっしゃっているようにIL-10がIL-10産生を誘導するということが無ければ、考え直さないといけないかなと思いました。IL-27も調べたんですが変化は無かったので、IL-10誘導の可能性のあるものをもっと調べてみます。 あとｒIL-10の添加もやってみようと思います！ ”IL-10がIFN-γを抑制”というのは、Th1/Th2のバランスのことを単純に考えていました。すみません。 amitsさんのおっしゃるように、もっと論文を調べてみます！ おおさんのおっしゃるようにIL-10に反応する株化細胞があればいいのですが、株化細胞に関して無知なので、もしどのような細胞がいいか知っていらっしゃる方がいましたらご教授お願いします。

(無題) 削除/引用 No.1096-6 - 2008/05/10 (土) 12:43:14 - おお まずは実験系を差支えない範囲でもう少し具体的に書かれた方がいいかと思います。中和抗体の評価を単純に見たいのであれば、ILー10を加え反応する株化細胞を用いて、そのリスポンスが抑えられるかを見れば良いわけですよね。 で貴方のやっている実験はもしかしてクルードな細胞集団でILー10の2次的、あるいは多次的な反応の結果を見たいのでしょうか? そうであれば、まずILー10が直接作用するターゲットをみつけ、それに対するリスポンスを見なければならないのではないでしょうか?場合によっては、ILー10を加え反応する株化細胞を用いて、そのリスポンスが抑えられるかを見て、それで効いているからOKとしてしまう場合もあるかと思います。 ちょっと具体的なコメントは今のところ難しいですね、、、、、

(無題) 削除/引用 No.1096-5 - 2008/05/10 (土) 02:15:54 - TX そもそもIL10産生をIL10依存的と仮説を立てる実験結果はあるのでしょうか？ 例えば,ある刺激でX細胞のIL10産生上昇が認められた。その際、Y細胞においても IL10産生の上昇が認められたなど。 抗IL10抗体を使わずとも、リコンビナントIL10の添加実験（Y細胞のみの状態で添加する） などでIL10依存的か否かある程度判断できると考えます。 私の勉強不足かもしれませんが、IL-10がオートクライン、パラクラインに作用し, IL-10の産生を誘導するなどの話は聞いたことがないですね。 > 本当に初歩的な質問になってしまうんですが、”IL-10がIFN-γを抑制する”ということでanti-IL-10抗体添加でIFN-γが上昇すれば抗体の活性は大丈夫といえるんでしょうか？ 何を持って、このように言っているのかがわかりません。対象とする免疫細胞では、 このようなことが論文で報告されているのでしょうか。 最初の方の質問から推測するに、ThのTh1,Th2への分化などを観察されているのでしょうか？ サイトカインは、対象とする免疫細胞により働きが異なりますので注意が必要です。

(無題) 削除/引用 No.1096-4 - 2008/05/09 (金) 23:36:52 - amits ＞”IL-10がIFN-γを抑制する”ということでanti-IL-10抗体添加でIFN-γが上昇すれば抗体の活性は大丈夫といえるんでしょうか それを実際行っている論文は見たことないです。 IL-10抗体を使っている論文で、自分のところでも再現できそうな実験を行えば、抗体が機能しているかどうかわかると思います。

抗体の活性を調べたい 削除/引用 No.1096-3 - 2008/05/09 (金) 22:29:02 - as 非常に分かりづらくて申し訳ありません。 実験としては、細胞のIL-10産生経路が、IL-10依存的かどうかを調べたかったのです。anti-IL-10を添加してIL-10mRNA発現が低下することを期待していたのですが、逆に高くなったり、結果も安定せず、anti-IL-10抗体がそもそも効いているのか分からなくなってしまいました。念のためELISAで測定したんですがもともと検出ぎりぎりのサンプルで、検出できなかったとはいえ、anti-IL-10抗体が効いているとは言いづらい状況です。 本当に初歩的な質問になってしまうんですが、”IL-10がIFN-γを抑制する”ということでanti-IL-10抗体添加でIFN-γが上昇すれば抗体の活性は大丈夫といえるんでしょうか？ 自分としても文献を調べたりしているんですが、まだ実験を始めて1年しか経っていないもので、本当にこれでいいのかどうかというのが分からず、不安です。 よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.1096-2 - 2008/05/08 (木) 22:46:23 - amits ＞anti-IL-10の効果を確認したいのですが 何をしようとしているか全くわかりません。 何をして、どうしたいのか。

anti-IL-10の効果確認法 削除/引用 No.1096-1 - 2008/05/07 (水) 18:19:53 - as anti-IL-10の効果を確認したいのですが、IFN-gで測定するのは有効なのでしょうか？IL-10産生性Th1細胞もあるので、IFN-gだけで評価していいものか迷っています。最適な評価方法があればどうか教えていただけませんでしょうか。よろしくお願いします。

全11件 ( 1 〜 11 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---