ASCT2という膜蛋白をWBで検出しようとしています。使うべきLysis Bufferは、RIPA(50mM Tris-HCL, 1%IGEPAL, 150mM NaCl, 1mM EDTA)+PPI(1mM PMSF, 1mMNaF, 1mM activated Na3VO4,protease inhibitor)です。ところが、これに変えてからASCT2どころかβ-actinすら検出できなくなってしまいました。lysis bufferが駄目らしいのはわかりますが、どう改善したらよいかわかりません。
1.RIPAの各溶液は、すべてDDWで溶かして作りました。
2.Tris-HClはTris溶液を作ってからHClを加えながらpHをあわせました。
3.PMSFはisopropanolで溶かしましたが、なかなか溶けにくくすべてを溶か しきることができません。
4.activated Na3VO4はboilと冷却を2回繰り返しpH10にあわせ、色も黄色から無色透明にしています。 |
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