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DSS腸炎モデルマウスからRNAが抽出できません トピック削除
No.4610-TOPIC - 2007/07/25 (水) 10:16:51 - ゴッゴ
C57BL/6マウスに3%DSSを7日間投与して、腸管組織を破砕し、TRIzolにてRNAを抽出しています。それで、RT-PCRでケモカインなどのRNA発現をみているのですが、DSS投与マウスからはケモカインだけでなく、β-actinもバンドがでません。水のみを投与したマウスではうまくいくのですが・・・
RNAの抽出法に問題があるのでしょうか？
　
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(無題) 削除/引用
No.4610-3 - 2007/08/02 (木) 17:24:42 - nanashi
DSSが抽出及びRT反応の阻害をしますので、抽出はカラム式抽出（RNeasy mini kit等）を用い、RT反応のプライマーはランダムプライマーではなく、Olig(dT)プライマーでやってみてください。それでうまく行くと思いますが。

確か・・・。 削除/引用
No.4610-2 - 2007/07/26 (木) 16:21:02 - マー坊
DSS腸炎からのRNA抽出には
リチウムクロライド処理が必要なはずです。（確か・・）
TRIzolのマニュアルにも書いてあったはずです。

DSS腸炎モデルマウスからRNAが抽出できません 削除/引用
No.4610-1 - 2007/07/25 (水) 10:16:51 - ゴッゴ
C57BL/6マウスに3%DSSを7日間投与して、腸管組織を破砕し、TRIzolにてRNAを抽出しています。それで、RT-PCRでケモカインなどのRNA発現をみているのですが、DSS投与マウスからはケモカインだけでなく、β-actinもバンドがでません。水のみを投与したマウスではうまくいくのですが・・・
RNAの抽出法に問題があるのでしょうか？
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