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ありがとうございました 削除/引用 No.4564-5 - 2007/07/26 (木) 14:00:50 - センター ありがとうございました。大変参考になりました。

(無題) 削除/引用 No.4564-4 - 2007/07/19 (木) 21:53:21 - カナマイシン >K様 ありがとうございました。 確かにいろいろ調べてみると、短い断片の分離はTBEの方が良いというのが定説みたいですね。 こちらでも調べて勉強になりました。 EMSAは・・・まあ今のところTAEでいいかな。 ただ熱が出にくいのはいいですね。TBE。

(無題) 削除/引用 No.4564-3 - 2007/07/18 (水) 16:32:39 - K ゲルシフトアッセイはやったことがないのですが 聞いた話では、TAEよりもTBEの方が分離能がよい、らしいです。 あと、TAEの発熱を嫌がって、TBEにするケースもあるようです。

(無題) 削除/引用 No.4564-2 - 2007/07/18 (水) 15:07:39 - カナマイシン ロシュのDIGゲルシフトのマニュアルが詳しいですよ。 DIG Gel Shift Kit, 2nd Generation http://www.roche-biochem.jp/catalog/manualPage.php?product=3.6.12.1.11.2 ↑日本語版もあってとても便利ですが、日本語版はしばしば間違ってます（何mMとか）。 というわけで、私はこれにほぼ従ってます。 ろ紙は 4 枚上下、ブロットはミニゲルあたり400 mA, 30 minです。 バッファーはゲル組成の関係上TBEでなくてTAEでやってますが。 ゲルシフトでTBEを使う利点て何ですかね？ 完全に横槍ですがご存知ならどなたか教えてください。

ナイロンメンブレンへの電気的転写法について 削除/引用 No.4564-1 - 2007/07/18 (水) 14:24:48 - センター いつもお世話になっております。私は現在EMSAを目的とした実験を行なっております。そこで、PAGE電気泳動後のDNAをポジティブチャージナイロンメンブレンへセミドライタイプのブロッターで転写しようとしておりますが、方法や条件等がよく分かりません。ウエスタンと同様に行なうらしいのですが、ゲルを挟み込むろ紙は何枚くらい使い、どのような液に浸すのか、単位面積当たりの電流（タンパクの場合は確か２から３ｍAくらいで６０−９０分だったような)はいくら位で時間はどれくらい行なえば良いのでしょうか？どなたかナイロンメンブレンへの転写を経験したことのある方、大変申し訳ありませんが御指導願えないでしょうか？よろしく御願いします。

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