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(無題) 削除/引用 No.4498-12 - 2007/07/13 (金) 10:44:00 - MS 同じメンブレンを使用してSIGMAのAC-15でWBしたらきれいにバンドがでました。 やっぱりSantaの抗体がダメだったみたいですね。 なので今クレームをつけています。 皆さんありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.4498-11 - 2007/07/11 (水) 10:57:01 - おくとぱす２号 成体心筋を染めたいのですが、Abcam（ab８２２７）は非交差でした。 SigmaのAC-15もカタログでは非交差となっています。 ラット成体心筋でも使える抗体を御存知の方、ぜひ情報をいただければと思います。

abcamのアクチン抗体 削除/引用 No.4498-10 - 2007/07/06 (金) 00:11:58 - 7878 私もloading controlとして使ってます。今までトラブルはありません。

(無題) 削除/引用 No.4498-9 - 2007/07/05 (木) 19:52:15 - おくとぱす サンタの同商品、Lot:I１２０６も使えませんでした。 同じメンブレンを使用して、Abcam（ab８２２７）で染めたら くっきりとバンドがでました。 他にAbcamの抗体を使っている方はいらっしゃいますか？

(無題) 削除/引用 No.4498-8 - 2007/07/05 (木) 15:31:55 - あ そんなに昔の話ではないです。 ロットはB2706です 私も出なくてかなり悩みました。

(無題) 削除/引用 No.4498-7 - 2007/07/05 (木) 10:05:40 - ＭＳ みなさんありがとうございます。 タンパク量を1/5にしてＷＢしてみましたが、残念ながら結果は変わらずで、43kDa付近にバンドは出てきませんでした。 「あ」さん sc-7210が使えなかった、というのは最近のことですか？ もしロットナンバーがわかれば教えて下さい。同じであればあきらめがつきますので。 とにかくこのまま試行錯誤を続けていても明るい光は見えそうにないので、Sigma：AC-15の購入を検討したいと思います。

(無題) 削除/引用 No.4498-6 - 2007/07/04 (水) 19:45:36 - 名無し 私は度重なる苦い経験から得た知恵で、抗体を買うときは、 （１）変に濃度が薄すぎるやつ。（２）量が少なくて-20C〜-80C保存のやつ。（途中で溶けてるかもしれないから）（３）２段階以上、精製してるやつ。（４）WBの推奨希釈率が1000倍未満のやつ　はできるだけ避けるようにしております。それかどうか分かりませんが、最近ハズレは少なくなりました。多少お役に立てれば幸いです。

(無題) 削除/引用 No.4498-5 - 2007/07/03 (火) 21:25:25 - D Santa cruzはactinすらまともに作れないんですね うちのラボでもSigmaのA1978 AC-15を使っています internal controlで何でも良いなら Sigma T9026のα-Tubulinの方がさらに染まり易いですよ 50-55 kDぐらいに目的のものがあって b-actinなら重ならずに一度に染められるならβ-actinで それ以外ならα-tubulinをオススメします しかしSanta cruzは水を入れているといわれても仕方がないですね

(無題) 削除/引用 No.4498-4 - 2007/07/03 (火) 18:57:35 - あ sc-7210 ですね。 ラビットのポリクロだと思います。 ロットが同一かは分かりませんが 使えない抗体が合ったので気になって調べてみたところ 同じカタログナンバーでした。

(無題) 削除/引用 No.4498-3 - 2007/07/03 (火) 09:18:16 - na-ta 私の場合は、Santa cruzからsigma(clone AC-15)に替えたらきれいにバンドが検出できました。

(無題) 削除/引用 No.4498-2 - 2007/07/03 (火) 01:19:44 - 名無し こういう場合に私がやる事を書きます。 （１）買ったお店に話をしてメーカーに伝えて別のロットと取り替えてもらう。アンケートみたいなのを書くときあるけど、ちょっと時間かかるかもしれないけどたいてい交替してくれるとおもう。 （２）アクチンなら大きな大学とかならたぶんどっか持ってるのでオールでメール流して探して、そこからもらう。 （３）面倒だけど一枚アクチン用に蛋白質量１／５くらいに減らしてアプライしてWBしてみる。アクチンもともと量多すぎなので抗体反応中かそのあとに途中で膜からはずれることあるかも。そうするとシグナルでなくなる。あとアクチン量多いからシグナルがすぐ飽和して、気をつけないと仮に量がちがっててもみんな同じに見えますけど大丈夫ですか？ 追加）　＞同じSANTA CRUZ社の二次抗体ではないのですが、そこに問題があるのでしょうか？ 　　　ないです。ただ２次抗体がダメになっている可能性はありますが、会社が一致していないか 　　　らどうこうというのは考え過ぎです。

Westernでactinが検出できません。 削除/引用 No.4498-1 - 2007/07/02 (月) 17:31:09 - ＭＳ とても初歩的なことで申し訳ありません。 Western blot で internal controlとしてactinを検出しようとしているのですが、目的のバンドが出ません。 どんな細胞にも存在していますから検出できないはずはないと思うのですが、初心者なものでどこに原因があるかよくわかりません。 使用しているのはSANTA CRUZ社のActin (H-196) sc-7210 です。 希釈を変えてみたり二次抗体を変えてみたりしているのですが、非特異的なバンドが増えるだけで目的のバンドは見られません。 同じSANTA CRUZ社の二次抗体ではないのですが、そこに問題があるのでしょうか？ ちなみに膜を染色するとタンパクのバンドは見えますし、actinではなく本来検出したかった抗体は問題なく検出できております。 ですから一次抗体もしくは二次抗体の結合に問題があるのではないかと思っているのですが、どうすればよいかわかりません。 どなたかわかる方がいらっしゃいましたら教えてください。 よろしくお願いいたします。

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