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(無題) 削除/引用 No.4482-4 - 2007/06/29 (金) 15:35:16 - YT ゲルは自作ですか？ running gelのpHとかが間違ってるとかそういうことは無いでしょうか？ 　 同じ様な経験は無いのですが、原理的にはrunnin gelのpHはかなり重要なはずなので、可能性の一つとしては考えうるかなと・・・

(無題) 削除/引用 No.4482-3 - 2007/06/29 (金) 10:46:33 - A 単に違うロットに交換してもらうとか、別の会社のマーカー買うとかで解決する問題ではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.4482-2 - 2007/06/28 (木) 20:54:02 - A 話が完全には理解できていないので想像も入っています。 話からするとPrestaining　markerを使っているということで いいのでしょうか？染色に使われているDyeが蛋白質に 結合していればその蛋白質がゲル上で分離されて色が薄く なるのは普通だと思いますが。 60kDa以上のmarkerがブロットされていないということですが 分子量の大きい蛋白質ほど移動しにくいのでただ単にブロット 時間が短い為に60kDa以上の蛋白質がブロットされていないだけ だと思います。おそらく1時間前後のブロット時間だと思いますが もう少し長くブロットしてみてください。自分の経験では Bioradのセミドライタイプのブロッターを使って230kDaの蛋白質 をブロットした時にのブロット時間は2時間30分だったと思います。 長時間のブロットを行う場合には熱の問題が出てきますので、 ブロットを低温室でおこなうなど工夫してください。

SDS-PAGEでバンドが消える 削除/引用 No.4482-1 - 2007/06/28 (木) 20:14:42 - ｔｋ SDS-PAGEを泳動していると、高分子およそ60kDa以上の高分子側のマーカーがランニングゲルに入ってから薄くなって消えていくという現象に悩まされています。 このゲルをトランスファーしてタンパクを染めてみると、高分子側だけがすっぽりと消えています。原因が全く分からず途方にくれてしまっています。 どなたか、このような経験をお持ちで対処法などを知っておられる方がいましたら、お願いいたします。

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