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(無題) 削除/引用 No.4457-5 - 2007/07/31 (火) 19:05:03 - 発色 Muscleさん、情報ありがとうございます。 > 茶色になるプローブはとても発現量が低いＲＮＡをターゲットにしています。 > しっかり深青色になるプローブは発現量が高いＲＮＡをターゲットにしています。 私も同じ結果です。 さらに発現量が同程度でも、プローブの短いものは茶色に、長いものは青色になります。 組織上のAP酵素（抗体）密度によって、色調が変わるのでしょうか。 もう少し情報がほしいので、新フォーラムにトピック立てます。 ありがとうございました。

茶色のまま論文に 削除/引用 No.4457-4 - 2007/07/31 (火) 17:56:42 - Muscle 私も茶色になっています。 発色前に浸潤させた溶液のｐＨを測定しても、ｐＨ９．５でした。 Ｒｏｃｈｅのサイトによれば、発現量やプローブの長さによっても変わるようですが、原因は分かりません。 茶色になるプローブはとても発現量が低いＲＮＡをターゲットにしています。 しっかり深青色になるプローブは発現量が高いＲＮＡをターゲットにしています。 論文の中には、茶色のままＰｕｂｌｉｓｈされているものもあります。 J.Comp.Neurrol. vol.482. pp217-243の論文は茶色です。

(無題) 削除/引用 No.4457-3 - 2007/06/25 (月) 12:00:02 - 発色 ＞aさん お返事ありがとうございます。 発色バッファー（100mM Tris, 100mM NaCl, 50mM MgCl2）は用事調製し、pHメーターでpH9.5に合わせています。 おそらく発色液にどこか問題があると思いますが、原因がわからない次第です。

(無題) 削除/引用 No.4457-2 - 2007/06/25 (月) 11:33:08 - a pHを上げて反応させれば青、pH下がると茶褐色になりますが、 9.5で洗っても青くならないのは？一度も経験したことないですね。 NBT/BCIP溶液のpHは大丈夫でしょうか？確かpH9.5のバッファーに希釈 しますよね

BCIP/NBTの色が茶色くなります 削除/引用 No.4457-1 - 2007/06/25 (月) 10:07:07 - 発色 in situ hybridizationの検出にBCIP/NBTを使っているのですが、シグナルが青くならず、褐色調を呈してしまいます。 Rocheのサイトに、「発色が赤茶色を呈する場合は、NBT/BCIPを添加する前に、pH9.5の検出用バッファーで、ターゲットスライドを十分に濯ぎます。」http://roche-biochem.jp/faq/25_114_ja.html とあったので、発色前に発色バッファーに10分ほど浸漬してみましたが、改善されませんでした。 シグナル自体はきれいに出ているので評価は可能ですが、本来の色が出ていないことが気になります。 このような経験がありましたら、解決法を教えてください。 よろしくお願いします。

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