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みなさん、ありがとうございます。 削除/引用 No.4452-8 - 2007/06/27 (水) 15:23:42 - energy 実際に顕微鏡観察してみました。 GFPのみを持ったもの、DsRedを持ったものも対象として同時に実験しました。 　 すると、GFPのみの細胞で,WIBフィルターを通して蛍光観察した後、WGフィルターで観察すると、DsRedはもっていないのに、細胞が赤くぼんやり光って見えました。 これは、WIBフィルターで励起されて見えた蛍光をWGフィルターが拾ってしまったということなのでしょうか？ 試しに、WIBフィルターで励起せずに、 はじめからWGフィルターで観察すると、なにも蛍光は観察されません。 ちょっと説明がわかりにくいのかもしれませんが、解決策があればぜひともお願いします（できればフィルター交換以外で）。

(無題) 削除/引用 No.4452-7 - 2007/06/24 (日) 11:32:27 - 通りすがり >GFPについては専用のフィルターがあるのですが、DsRedの専用フィルターという >ものはあるのでしょうか？DsRedの励起、蛍光波長を調べたのですが、わかりま >せんでした‥‥。 olympusのfilter cubeでしか知りませんが U-MRFPHQ がDsRed専用です。 http://microscope.olympus.com/uis2/MIRROR/U-MRFPHQ/ そのほかのCFP,GFP,YFPなどの情報はまとめて↓に http://microscope.olympus.com/uis2/mirror.html

DsRed-Express 削除/引用 No.4452-6 - 2007/06/24 (日) 10:31:48 - Kazu 僕が使用したclontechのDsRed-Expressは557nmと579nmでした。 http://clontech.takara-bio.co.jp/product/families/gfp/lc_table2.shtml 他にも単量体のDsRed-Monomer等もあるみたいですが、こちらは使ったことがありません。

ありがとうございます。 削除/引用 No.4452-5 - 2007/06/23 (土) 20:33:20 - energy みなさん、早速、お答えいただいてありがとうございます。 とりあえずは、WGフィルターとWIBフィルターで観察してみます。 近いうちに観察する予定なので、それが終わったら、またアドバイスお願いしたいです。 GFPについては専用のフィルターがあるのですが、DsRedの専用フィルターというものはあるのでしょうか？DsRedの励起、蛍光波長を調べたのですが、わかりませんでした‥‥。

(無題) 削除/引用 No.4452-4 - 2007/06/23 (土) 16:23:21 - D 波長が近いと漏れてしまうこともあるようです 自分のところでは555と488を赤と緑に使用していますが 漏れるということをメーカーの人に相談したところ 新しいFilterをデモしてもらいました Semrockというところにメーカー用に作らせたらしいのですが 非常に優秀なFilterで、一切漏れがなくなり、S/N比も良くなりました 参考 http://www.opto-line.co.jp/jp/sem/sem_singleband600700.html 透過光の帯域が波形ではなく、直角に切り立つように長方形になっているため、漏れがないそうです 通常だと波形と波形でどうしても波のすその部分がかぶってしまうそうです

バイオゼロ 削除/引用 No.4452-3 - 2007/06/23 (土) 12:36:22 - Kazu キーエンス社のバイオゼロを使っていますが、問題ありません。DsRedはTRITCフィルターを用いています。

(無題) 削除/引用 No.4452-2 - 2007/06/23 (土) 10:16:39 - 通りすがり >DsRedの発する蛍光を緑のフィルターが拾ってしまったり、 >GFPの発する蛍光を赤のフィルターが拾ってしまったりするものなのでしょうか？ 通常の実験の場合は GFPをWIB系 (U-MWIB2) DsRedをWG系(U-MWG2) を使って見てますが、通常レベルではほとんど問題はありませんし、 かなり広く使われてる組み合わせだと思います。 ただ、GFPのほうをTranientに発現させて、 発現量がものすごく高い細胞などでは明らかにU-MWG2のほうに漏れこんでくるときはあります。 しかし、目で見て明らかにそういうのは避けられるのでそんなに問題になることはないですね。

DsRedとGFPの蛍光顕微鏡観察について 削除/引用 No.4452-1 - 2007/06/22 (金) 21:46:07 - energy DsRedとGFPのタンパク質の共局在性を見たいのですが、 DsRedの発する蛍光を緑のフィルターが拾ってしまったり、 GFPの発する蛍光を赤のフィルターが拾ってしまったりするものなのでしょうか？ 　 それぞれに専用のフィルターを買わないと難しいのでしょうか？ 現在はGFPはWIBフィルター DsRedはWGフィルターで観察する予定でいます。 蛍光顕微鏡観察に詳しい方、ぜひともアドバイスお願いします。

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