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No.4416-TOPIC - 2007/06/15 (金) 14:13:48 - 勉強中
PCRでプライマーに制限酵素配列等を付け加える場合、何かプライマー作成のコツはありますか。 余分に数塩基付加した方がいいと聞いたのですが、どこに、どの塩基(G、Cがいいのでしょうか)を加えるのがいいのでしょうか。 また、アニーリング温度を見積もる場合、付け加えた部分は計算に入れなくていいのでしょうか。 人によって好みがあると思いますが、コツがあれば教えて頂けるとありがたいです。
 
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(無題) 削除/引用
No.4416-4 - 2007/06/18 (月) 03:28:57 - 勉強中
ありがとうございます。 非常にいい情報です。 制限酵素配列でない配列を付加する場合のコツってあるのでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.4416-3 - 2007/06/15 (金) 14:44:23 - ねこたろう
制限酵素の基礎知識の内容はNEBの英語版の翻訳なのでoligoの制限酵素認識配列+何塩基ついていれば切断可能かはNEBのWEBページから調べられますよ
http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/cleavage_olignucleotides.asp
http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/cleavage_linearized_vector.asp

NEBの 削除/引用
No.4416-2 - 2007/06/15 (金) 14:31:50 - tm
「制限酵素の基礎知識」に制限酵素部位の前につける配列がのってますよ。
でも、この間業者さんに聞いたら、もうないっていわれたけど…

プライマー 削除/引用
No.4416-1 - 2007/06/15 (金) 14:13:48 - 勉強中
PCRでプライマーに制限酵素配列等を付け加える場合、何かプライマー作成のコツはありますか。 余分に数塩基付加した方がいいと聞いたのですが、どこに、どの塩基(G、Cがいいのでしょうか)を加えるのがいいのでしょうか。 また、アニーリング温度を見積もる場合、付け加えた部分は計算に入れなくていいのでしょうか。 人によって好みがあると思いますが、コツがあれば教えて頂けるとありがたいです。

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