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(無題) 削除/引用 No.4394-5 - 2007/06/15 (金) 12:25:58 - 名無し 分子量の小さい蛋白質発現させようとして上手くいかないとぼやいている人、前にいた。なんか、小さいのは分解とかで上手く発現できない事があるよ、と誰かに言われたといってた。ほんとの所はどうなのかわからないけど、そういうひといた。

(無題) 削除/引用 No.4394-4 - 2007/06/11 (月) 14:37:14 - 通りすがり 以前ラボの同僚が同様の実験を行って、 既知のタンパクに結合するドメインを特定するために 有るタンパクをfull lengthから削っていき最終的に10アミノ酸まで 同定してましたので、20とかなら全然OKでしょう。 ただたいていの場合、異なる欠失体どうしの発現量を揃えて比較する必要があるのと、分子量が小さくなっていくと単独では発現そのものを確認するのがかなり厳しいですので、大腸菌で発現させるならGST、哺乳類の細胞などでやるならGFPなどに欠失体のドメインをつなげる形でやったほうがよいでしょう。

(無題) 削除/引用 No.4394-2 - 2007/06/11 (月) 10:58:08 - う〜んと 小さすぎて発現できなかったっていう話は聞いたことがないですが、小さすぎて発現を確認できないっていう危険ならあるかもしれませんね。

低分子蛋白の細胞内導入について。 削除/引用 No.4394-1 - 2007/06/11 (月) 01:09:15 - Ａ 　現在、ある遺伝子を削っていき、フェノタイプを持つ最小のドメインの同定を行おうとしております。　 　次に設計しようとしている遺伝子サイズが20アミノ酸とかなり低分子になり、このサイズの遺伝子をpcDNA3.1に挿入しても、実際に蛋白へと翻訳されるかがかなり不安であります。このような低分子の遺伝子をベクターに導入した経験がないので、だいたいどのくらいの遺伝子サイズでしたらベクターに挿入しても翻訳されるのでしょうか？教えてください。もしもの場合は合成ペプチドを作って細胞内に導入しようと考えております。

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