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(無題) 削除/引用 No.4380-9 - 2007/06/09 (土) 19:01:37 - UV このカラムで精製したDNAのUVスペクトルを取ると変な肩があるので、私はいつもさらにフェノール・クロロホルム抽出→エタノール沈殿しています。フェノール・クロロホルム抽出で除けるもののようです。これをして溶け残りが出たことはありません。

(無題) 削除/引用 No.4380-8 - 2007/06/09 (土) 16:20:26 - KO 　自分の経験でも、イソプロ沈のあとの 白い沈殿が一部解けないことがあります。 　自分はカラムの担体が出てきたのかと思ってました。 しかしイソプロ沈の沈殿の大部分はDNAなので、TEなどで溶かした後に 遠心して不溶性物質を除いて使って問題なくやっています。 　ちなみにイソプロ沈の後の沈殿は、70%EtOHでリンスして 乾燥させてから溶かしていると思いますが、 乾燥は自分はほとんどやってません。 リンス液を完全にyellow tipで除いたら 2-3分だけ風乾してすぐにTEに溶かしています。 乾燥しすぎると解けにくくなるので。

(無題) 削除/引用 No.4380-7 - 2007/06/09 (土) 10:45:47 - ryo 溶けない沈殿は、炭水化物かもしれません。キアゲンのkitのトラブルシューティングか、Web上のQ and Aかに記載されてあったと思います。

(無題) 削除/引用 No.4380-6 - 2007/06/08 (金) 22:21:35 - A 解けない沈殿は多分蛋白質のコンタミでしょう。自分で 確認したわけではありませんが。解けた皆さんが仰られて いるように一晩放置して上清に目的のプラスミドがあれば OKでは。少なくとも私はその方法で問題があった事は ありません。

(無題) 削除/引用 No.4380-5 - 2007/06/08 (金) 18:24:47 - PAC >インサートの長さは約３Kbpでベクターは１０Kbpくらいのものです。 >ミニプレップではとれます。 Plasmid自体はそんなに巨大ではないのですね。 mini-prepでは取れて、スケールアップしたmidiとかではなぜなのか解りませんが取れない事が多々あるようです。その場合はmini-prepをたくさんやるのが一番手っ取り早いような気がします（他の多くの研究者談）。 あくまでこれは解決策でなくて、私の意見ですが、私なら先に提案した事をやってみてだめならmini-prepします。

(無題) 削除/引用 No.4380-4 - 2007/06/08 (金) 17:22:45 - A ミニプレップではとれます。

(無題) 削除/引用 No.4380-3 - 2007/06/08 (金) 17:21:33 - A インサートの長さは約３Kbpでベクターは１０Kbpくらいのものです。

(無題) 削除/引用 No.4380-2 - 2007/06/08 (金) 16:17:35 - PAC 失敗かどうかの前に.........下記どれかをやってみては如何でしょうか？ちなみに順不同です。 一つ、4℃で一晩放置した後、遠心して上精をgelに流してみる。何もなければ失敗。 一つ、50℃くらいで30分インキュベートしてみる（確か説明書にそのような事が書いてあったと思います）。溶けたら、とりあえずよしとして、gelに流して確認する。もし溶けなかったら遠心して、上精をgelに流してみる。何もなければ失敗。 番外、念のために帰宅前にlarge cultureを開始しておき、明日新たにmidi-prepを開始するまでに説明書のトラブルシューてイングをもう一度読み直す。 質問ですがplasmid+insertの大きさはどれくらいですか？mini-prepでは取れますか？

キアゲン　midi 削除/引用 No.4380-1 - 2007/06/08 (金) 14:41:16 - A はじめまして、よろしくお願いします。 midiの最後の沈殿ですきなバッファーで溶かすところなんですが， ペレットが溶けません。失敗ですか？

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