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ありがとうございます。 削除/引用 No.4369-6 - 2007/06/14 (木) 23:07:21 - 膜抵抗 ＴＳ様　ありがとうございました。 評価も実験開始時をコントロールとして、それとの比を評価している 報告もありますよね。 しばらく毎日抵抗を測定してきます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.4369-5 - 2007/06/14 (木) 22:29:15 - TS 500-1000ohm/insertというのは、6.5mmのtranswellを使ったときの２日目あたりの実測値です。･cm2に直すと、200-400というところでしょうか？ 実験時のTERについてですが、いままで２つの研究室でCACO-2を使ったことがあり、飼い方（たぶんFBSや継代方法等々）の違いで結構差がありました。11-14日目くらいに実験していたときに、おおざっぱに平均値を言うと、一つめの研究室では1000ohm･cm2,２つめの研究室では、その半分くらいでした。どちらでも実験はできてましたので、このようなTERの差はあまり気になしなくて良いと思っています。 それと、経日的なTER変化を簡単に言うと、コンフルエント直後に急上昇します。そのあと２日ほど低下した後、徐々に上昇していくというパターンが一般的です。これは、CACO-2だけでなくMDCKでも共通です（理由は文献などを読めばわかると思います）。 それと、96穴のtranswellは使ったことがありませんが、特に問題はないと思います。スクリーニング、高価な試薬を使うときなどには適しているのではないでしょうか？私の実験では、実験後にWestern blot用にサンプル採取したり、免疫染色することが多いので、6.5, 12, 24mmのtranswellを使っているだけです。

TERその後 削除/引用 No.4369-4 - 2007/06/14 (木) 11:01:57 - 膜抵抗 TER測定のその後なんですが・・・。 何とか細胞をコンフルエントまで、こぎ着けました。 （やはり、TS様よりも多めの細胞をまかざるをえませんでしたが） そこで、初めて抵抗を測定してみました。 測定機器はEVOMを用いて、付属の電極（コスター96穴専用ではありません）を用いました。 抵抗値はブランク（メディウムのみ）で90ohm (TER; 29.7ohm・cm2)でした。 Caco-2細胞ではTERで15ohm.cm2前後でした。 まだ、コンフルエントになって間もないせいかもしれませんが、 文献と比べても全然低い値です。これから経時的に増大していくことを期待していますが 最初（コンフルエント２日目）はこれくらいの値でしょうか？ TS様の500-1000ohm/inserという数値はインサートの面積をかける前の値ですか。 TER測定には96穴のような小さなwellはあまり使わないのでしょうか。 （試薬が高価なため、少しでも小量で行いたいと考えております） 周りにもこの実験をしている人がおらず、状況がよくわからず困っています。 ご指導のほどよろしくお願い申し上げます。

ありがとうございます。 削除/引用 No.4369-3 - 2007/06/07 (木) 21:04:50 - 膜抵抗 ＴＳ様 ありがとうございます。 確かに細胞数は多すぎるくらいだと思います。 他の資料でも翌日にコンフルエントになるくらいがいい　と書いてました。 やはり、Caco-2ってまいて翌日にコンフルエントになることってあるんですね。 今一度cell countの方法から振り返ります。 ありがとうございました。

細胞数 削除/引用 No.4369-2 - 2007/06/07 (木) 17:34:37 - TS 書かれている細胞数が本当であれば、十分（過剰では？）だと思います。この数を播くと、次の日にコンフルエントになるような気がします。大変失礼なんですが、細胞数の計測は大丈夫でしょうか？ちなみに、私は１桁くらい少ない数を播きますが、次の日にコンフルエントです。TERは、500-1000ohm/insertの間ですね。 細胞を播いてから２，３分後に顕微鏡で細胞数を確認してみたらどうでしょうか？もちろん細胞は接着してませんが、かなり隙間なく細胞が確認できるくらいで良いです。そうなってなければ、播いている細胞数が少ないんだと思います。

Caco-2細胞でのTER測定 削除/引用 No.4369-1 - 2007/06/07 (木) 15:17:57 - 膜抵抗 Caco-2を用いたTERの測定を行っています。 なかなかconfluentにならずに困っています。 培養にはcostar社のTranswell 0.4 μm pore, 6.5mm insert (collagen coated)を使っています。 まく細胞数は今は各insertにCaco-2細胞を2-3X10*5個まいています。 mediumは毎日交換しており、徐々には育っていますが、10日経ってもconfluentにはなっていません。（collagen coatedでは細胞の輪郭は観察可能です） 細胞自体は普通に培養・継代するのには何ら問題ないのですが、 Transwellでは増殖が遅いのでしょうか？ TER測定もはじめてなもので、困っています。 過去のトピックも検索しましたが、まいている細胞数も十分と思います。 どうか、ご指導のほどよろしくお願いします。

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