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genomic real time PCRについて トピック削除
No.4368-TOPIC - 2007/06/07 (木) 10:12:51 - 武者修行
genomeのコピー数を調べるためのreal time PCRについてご経験のある方、もしくは詳しい方はいらっしゃらないでしょうか。現在array CGHで欠失がある領域を同定しているのですがそのデータの裏を取るためにreal time PCRでコピー数を比較したいと思います。
 そこでinternal control になる遺伝子(actin-betaやGAPDH)のgenomic real time PCRにつかえる primer の配列を教えていただけないでしょうか。文献があればできれば文献も教えていただけたらありがたいです。
 
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1hit/genome ? 削除/引用
No.4368-5 - 2007/06/14 (木) 17:45:44 - 悪地蔵
アジュバント様

申し訳ありませんが、ApoB, UBFは1hit/genomeであることについて
書かれている文献について教えていただけませんでしょうか。

Applied BiosysytemsではRNase PをInternal Controlとする試薬を
販売しているようですが、詳細な記載がされておりません。

お願い申し上げます。

(無題) 削除/引用
No.4368-4 - 2007/06/13 (水) 21:25:23 - Jackie
Genome PCRのインターナルコントロールならRT-PCRのインターナルコントロールと違って、確実に検出できる遺伝子だったら何でもいいでしょう(Pseudo遺伝子とか増幅がない遺伝子)。
RT-PCR用のプライマーは長いIntronを挟んでいる可能性がありますねで、気をつけなければいけません。

マウスだったら、Jaxson Laboratory(www.jax.org)のGene knockout/transgnic miceのGenotypingでWild-type allele検出(たとえばp53)に使われているプライマーでいいのではないですか(http://jaxmice.jax.org/pub-cgi/protocols/protocols.sh?objtype=protocol&protocol_id=549)。

ひょっとして、Humanですか。これも文献で調べたら、p53とかだったら簡単出てくると思いますが。

(無題) 削除/引用
No.4368-3 - 2007/06/13 (水) 17:29:11 - アジュバント
Human genomeの場合、ApoBやUBFの配列からプライマーをデザインしてみてはいかがですか?ApoB, UBFは1hit/genomeです。

(無題) 削除/引用
No.4368-2 - 2007/06/08 (金) 12:44:57 - 通りすがり
GAPDHはゲノム上にpseudo geneが多いので、この場合は使えません。
X染色体上の遺伝子を使って、雌雄差があるのをポジコンで確認します。
武者修行頑張ってください。

genomic real time PCRについて 削除/引用
No.4368-1 - 2007/06/07 (木) 10:12:51 - 武者修行
genomeのコピー数を調べるためのreal time PCRについてご経験のある方、もしくは詳しい方はいらっしゃらないでしょうか。現在array CGHで欠失がある領域を同定しているのですがそのデータの裏を取るためにreal time PCRでコピー数を比較したいと思います。
 そこでinternal control になる遺伝子(actin-betaやGAPDH)のgenomic real time PCRにつかえる primer の配列を教えていただけないでしょうか。文献があればできれば文献も教えていただけたらありがたいです。

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