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フィルターへのDNAの吸着 トピック削除
No.4347-TOPIC - 2007/06/04 (月) 22:24:39 - ゆきやなぎ
ChIPアッセイでsonicationしたゲノムを電気泳動しても、ほとんどDNAが見えません。

他の人たちと違う点は、sonicationしたサンプルを遠心して上清を回収した後、さらにsteradiscでフィルターろ過しているという事があります。

あまり気にしていなかったのですが、こういったフィルターへのDNAの吸着は非常に多いものなのでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.4347-4 - 2007/06/06 (水) 07:25:26 - 〜
はずれのプラスミドなどがあったら、
フィルターを通す前後を泳動してみてはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.4347-3 - 2007/06/05 (火) 20:27:15 - ゆきやなぎ
膜の材質はポリサルホンという物質で、たんぱく質の吸着が少ないとはありますが、DNAの吸着に関しては何も記載がありませんでした。

ポアサイズが0.2umですので、液が接触する面積としては膨大になる気がするので、やはり結合する可能性は高いでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.4347-2 - 2007/06/05 (火) 15:25:36 - 〜
steradiscのフィルターの材質は様々なようですね。

ハイブリダイゼーション用に無電荷や正電荷のナイロンメンブレンにDNAを結合させる場合がありますが、
結合しないことが分かっている材質のメンブレンでしょうか。

フィルターへのDNAの吸着 削除/引用
No.4347-1 - 2007/06/04 (月) 22:24:39 - ゆきやなぎ
ChIPアッセイでsonicationしたゲノムを電気泳動しても、ほとんどDNAが見えません。

他の人たちと違う点は、sonicationしたサンプルを遠心して上清を回収した後、さらにsteradiscでフィルターろ過しているという事があります。

あまり気にしていなかったのですが、こういったフィルターへのDNAの吸着は非常に多いものなのでしょうか?

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