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(無題) 削除/引用 No.4299-6 - 2007/05/29 (火) 19:12:26 - R 一過性発現用のベクターには大腸菌用の耐性遺伝子のみで 真核生物用の耐性遺伝子が入ってないのが多いと思います。 もちろん、stableを作製する用のベクターでtransientに発現させることは可能です。

(無題) 削除/引用 No.4299-5 - 2007/05/29 (火) 18:14:25 - TF 短期的にはその通りです。それを利用して、puromycinのように切れ味のよい薬剤で選択をかけ、プラスミドを取り込んだ細胞のみをtransientに回収する方法もあります。 ただし、導入されたプラスミドは複製されなければいずれは分解されるか、細胞分裂に伴って希釈されていきます。逆にSV40 oriを含んだプラスミドが、COS細胞や293T細胞の中で増幅されるような場合には、コピー数が上がりすぎて最後は細胞が死んでしまいます。 いずれにしても安定に導入遺伝子が発現し続けるためには、ゲノムに組み込まれる必要があるということです。 これとは別に、ウイルス由来の複製oriと特定の宿主細胞を使って、プラスミドを安定に複製させる系もありますが、ここでの話とは別のことなので。

(無題) 削除/引用 No.4299-4 - 2007/05/29 (火) 18:03:36 - さくら お返事ありがとうございます。 薬剤耐性マーカーで、選別していくとありますが、 Trangentでも、薬剤耐性の遺伝子を含んでいるのですし、 ゲノムに組み込ま無い細胞も、生き残っていく、 と言うことにはならないのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.4299-3 - 2007/05/29 (火) 12:41:22 - TF 正しく理解しておられると思いますよ（ただしtransient）。 発現プラスミドをトランスフェクションして、その導入されたプラスミドからの発現に期待するのがtransient。ただし、COS細胞＋SV40 oriプラスミドを使った場合のように、導入したプラスミドが複製して増幅される場合もあります。 transientと同じ操作をした（だから一過的な発現も当然起こった）細胞の中に、まれに導入されたプラスミドがゲノムDNAに組み込まれるものがあります。そういう細胞を薬剤耐性マーカーなどを指標に選別して確立したものがstable cell lineです。

Trangent と　stableの違い 削除/引用 No.4299-1 - 2007/05/29 (火) 12:20:19 - さくら かなり恥ずかしい質問ですが、 一過性発現株と、安定発現株の原理的な違いがよくわかりません。 特定遺伝子をTransfection後、（偶然？）ゲノムに取り込まれて、 代を経ても目的遺伝子産物が安定して発現するのが、 安定発現株と言うことでしょうか？ 一過性の発現株は、同じように形質転換しても、 ゲノムに取り込まれない、ということなのでしょうか？ ゲノムに取り込まれる、取り込まれないの違いはどこにあるのでしょうか？ 形質転換の試薬のプロトコルなどを見ていても、 安定発現株を作る場合も、一過性の発現株を作る場合でも 同じプロトコルを使うようだし、 ベクターも同じようなものを使っているように見えるのですが。 教科書的な本を何冊かあたってみたのですが、 いまいちすっきりしません。 詳しくご存知の方、教えてください。

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