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IBの検出 トピック削除
No.4297-TOPIC - 2007/05/29 (火) 07:32:48 - あべちゃん
新しく移った研究室でウエスタンブロットをしたいのですが、暗室がありません。
なので、はじめてAPによる発色でIBの検出を行いたいと思っています。
みたいものは培養細胞の内在性タンパク質です。

ECLより感度が悪いというイメージがありますが、そういった情報を含めAP検出キットに関することをお教え願えますでしょうか?よろしくお願いします。
 
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発色でIB検出 削除/引用
No.4297-3 - 2007/05/29 (火) 09:16:00 - あべちゃん
おおさん、
アドバイスを頂きましてありがとうございます。
Molecular Cloningを見直して勉強したいとおもいます。
蛍光はスキャンする機械がないので、発色にて検出したいと思います。


プロメガ社のProtoBlot II AP systemsや
Molecular Probe社(invitrogen)のPro-Qウエスタンブロット染色キット
などの発色系検出キット類の情報が有りましたら、お教え願えますでしょうか?
よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.4297-2 - 2007/05/29 (火) 08:21:38 - おお
You can refer Molecular cloning 3rd ed., Appendix 8.55.

HRP with tetramethyl-benzidine and AP with nitro blue tetrazolium, both can detect 100pg.

This is more sensitive than classical chemiluninescent regents (300pg-). But you should be more careful about quantification.

If you can use fluorescent scanner, fluorescent dye conjugated secondary antibodies may be useful.

IBの検出 削除/引用
No.4297-1 - 2007/05/29 (火) 07:32:48 - あべちゃん
新しく移った研究室でウエスタンブロットをしたいのですが、暗室がありません。
なので、はじめてAPによる発色でIBの検出を行いたいと思っています。
みたいものは培養細胞の内在性タンパク質です。

ECLより感度が悪いというイメージがありますが、そういった情報を含めAP検出キットに関することをお教え願えますでしょうか?よろしくお願いします。

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