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(無題) 削除/引用 No.4296-7 - 2007/05/30 (水) 00:21:50 - あや 御指導ありがとうございます。 参考にしてやってみます。

(無題) 削除/引用 No.4296-6 - 2007/05/29 (火) 23:44:14 - IKA TCAを完全に除けられれば問題ないと思います。タンパク量が多い場合などは、注意深く取り除いても黄色くなってしまうサンプルがあるかもしれません。そのときは、サンプルバッファーで沈殿を溶かした後1/50程度の1M Tris-HCl (pH8.0)を加えれば良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.4296-5 - 2007/05/29 (火) 17:22:02 - K TCAさえ完全に取り除けば、アセトンウォッシュは１回で十分です。 私はあらかた取り除いた後、チビタンでスピンダウンして、ホワイトチップでTCAを取っています。 その後、アセトンウォッシュ、風乾(うちでは真空ポンプですが)、2*SB に溶解して、 ヒートショックして、SDS-PAGEか-20℃保存です

(無題) 削除/引用 No.4296-4 - 2007/05/29 (火) 08:14:08 - あや アセトンウォッシュは１回だけなんですけど、２回くらいやったら大乗うぶでしょうか？ またTrisを加えるとは、TCA沈殿前に入れるのでしょうか?入れるとしたらどれくらいですか？ 質問ばかりで申し訳ございません…。

(無題) 削除/引用 No.4296-3 - 2007/05/29 (火) 03:19:21 - IKA Trisを少し加えてあげれば大丈夫です。

(無題) 削除/引用 No.4296-2 - 2007/05/29 (火) 01:10:06 - KO おっしゃるとおり、TCAが残っているのだと思います。 BPBは酸性では黄色になりますから。 アセトンのwashを繰り返すか、 SDSサンプルバッファーを濃い目に 入れてみたらいかがでしょうか。

サンプルバッファーが黄色くなる 削除/引用 No.4296-1 - 2007/05/29 (火) 00:49:28 - あや SDS-PAGEに使用するサンプルの濃度が薄いのでTCA沈殿で濃縮し、サンプルバッファーに溶かしています。 沈殿したペレットをピペッティングで溶かしていると、青いはずのサンプルバッファーが黄色くなってしまうものがあります。 TCAが残ってしまっているのでしょうか？ TCAで沈殿させた後アセトンウォッシュして風乾してサンプルバッファーに溶かしています。

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