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(無題) 削除/引用 No.4279-5 - 2007/05/30 (水) 10:01:52 - ねこたろう geneさん、パンタさん、〜さんありがとうございます。 使用予定の発現ベクターは通常のコマーシャルベースのものではないのでSac�UはMCSにとりあえずあるという程度です。 しかし、東洋紡のTAクローニングベクターのSac�Usiteは問題なく切断できました。 認識配列の前後の配列によってpreferenceの程度が変わるということですが現在のところ予想できないのが厄介ですね。

(無題) 削除/引用 No.4279-4 - 2007/05/29 (火) 10:28:49 - gene NEB、Fermentus、TAKARAなどのカタログには、λDNAに4つあるSacIIサイトのうち特定の1サイトはこの酵素に対して耐性であるということが書かれています。これはisochizomerでも同じということです。 逆に言うと、残りの3サイトは当たり前に切れるということで、まさに周辺の配列によるということでしょうね。 目的からいっても、クローニングサイトにあるSacIIはふつうに切れるようになっていると思いますが、あとはインサート側がどうか、というところでしょう。

(無題) 削除/引用 No.4279-3 - 2007/05/28 (月) 22:50:35 - パンタ 切れなかったこと、、、あります。 まったく切れなかったというわけではないのですが、50倍切れないと言われれば確かに、というくらいでした。オーバーナイトで処理しても、明らかに効率が悪いのです。（これがきっかけで、preferenceという現象を知りました） ずいぶん前のことですのではっきりは覚えていませんが、2社のSacIIを試しても同じような効率だったので、あきらめてDNA、酵素ともに多めに反応し、うっすら見えるバンドを回収してクローニングした覚えがあります。 個人的にはNEBのカタログに載ってないXhoIでもpreferenceがあると思っています。しかもかなり切れにくい。

(無題) 削除/引用 No.4279-2 - 2007/05/26 (土) 08:26:41 - 〜 切れなかったことはありません。 50倍なら、サブクローニングレベルでは問題ないと思います。

制限酵素のpreferenceについて 削除/引用 No.4279-1 - 2007/05/25 (金) 21:38:56 - ねこたろう ベクターをpreferenceのある制限酵素SacIIでマルチクローニングサイトを切断してインサートを入れようとおもいますがSacIIのpreferenceはどの程度あるのでしょうか？制限酵素の基礎知識（NEB）ではサイトによって通常の1倍から５０倍切れにくいものがあるとかかれていますが使用経験のある方教えてください。

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