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銀染色
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No.4270-TOPIC - 2007/05/24 (木) 17:27:39 - k
拝見させていただいております。
銀染色について質問させてください。
二次元電気泳動ゲルをCBB染色していたのですが、
銀染色をすることになりました。
研究室にキットがあったので 試しにやってみたところ
染まりはしたのですが、CBBよりもスポットが減少したり
ぼやけたりしています。
銀染色とCBBでは多少の染色スポットも違いはあると思いますが
基本的には、銀染色では感度が上がるように思っているので不思議です。
試薬の古さなどでも 極端に感度が違うものでしょうか?
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ありがとうございます
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No.4270-4 - 2007/05/25 (金) 13:47:03 - k
〜 さん ひろさん
ありがとうございます。
今回、染色に用いたキットは 十数年使われていなかったことが
わかり、購入しなおすように指示されました。
CBB染色した後のゲルでも銀染できることは知りませんでしたので
勉強になりました。
メーカーさんとのやり取りのお話もとても参考になりました。
(無題)
削除/引用
No.4270-3 - 2007/05/24 (木) 20:58:44 - ひろ
ある質量分析をしてくれるメーカーがうちの研究室にきてくれたときに銀染のkitを紹介してくれたのですが、メーカーによって結構違いました。
あるメーカーでは分子量の高いタンパク質は濃く出るけど、分子量の低いタンパクはでないとか、その逆もあったり。
で、そのメーカーさんはWAKOの銀染を薦めていました。
分子量によらず平均的に検出可能っていうデータ見せてくれました。
もしくは銀染よりは多少感度落ちますが、ネガ染などもCBBより感度高くでよいですよ
(無題)
削除/引用
No.4270-2 - 2007/05/24 (木) 18:38:55 - 〜
感度が低いのであれば、どこかの処理を間違えているのかもしれません。
ぼやけているというのは感度が高いため、スポットの周囲のCBBで染まらないくらいの量のタンパク質を検出しているからかもしれません。
CBB染色した後のゲルでも銀染できますので、
何度か練習してみてはいかがでしょうか。
銀染色
削除/引用
No.4270-1 - 2007/05/24 (木) 17:27:39 - k
拝見させていただいております。
銀染色について質問させてください。
二次元電気泳動ゲルをCBB染色していたのですが、
銀染色をすることになりました。
研究室にキットがあったので 試しにやってみたところ
染まりはしたのですが、CBBよりもスポットが減少したり
ぼやけたりしています。
銀染色とCBBでは多少の染色スポットも違いはあると思いますが
基本的には、銀染色では感度が上がるように思っているので不思議です。
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